紫外可见近红外分光光度计系数倍率法

紫外可见近红外分光光度计系数倍率法

系数倍率法

（1）系数倍率法仪器原理（见图 12） 双波长分光光度法中用等吸收点波长消除干

扰，是测定两组分体系的一个好方法。但是在干扰组分的吸收光谱中，找不出等吸收点时，

就不能用此法消除干扰。系数倍率法克服等吸收波长的局限性。

系数倍率法在双波长分光光度计中增加一个系数倍率器（见图 12），获得差示信号与干

扰组分含量无关。

⊿A＝Aλ₂－K₁Aλ₁＝kC

式中⊿A――差示吸光度值；

Aλ₂――样品溶液在测量波长 λ₂ 处的总吸光度值；

Aλ₁――样品溶液在参比波长处的总吸光度值；

K₁ ――校正系数，通过 K₁ 校正扣除了干扰组分吸光度；

K ――标准曲线斜率；

C ――样品溶液待测组分浓度。

按着上述原理，可用下式求 K₁ 系数。

因此，只要测出干扰组分在 λ₂ 和 λ₁ 处的吸光度值，便求解 K₁，实际上它是对干扰组

分的校正系数。K₁ 与干扰组分浓度无关，只与 λ₁ 位置有关。

图 12：各种吸收光谱的组合及系数倍率法仪器示意图

1－光源；2—单色器；3—切光器；4—吸收池；5—光电倍增管；6—初级放大器；

7—同步放大器；8—对数转换器；9—系数倍增器；10—差算电路；11—数字电压表

（2）举例

①食品红 2 号（R₂）和山梨酸的测定 由图 13 可见，为测定 R₂ 和山梨酸混合样品两

组分，可选山梨酸的 λ_ma_x＝262 nm 为测定波长 λ₂，以 320 nm 为参比波长（λ₁）测定山梨酸

含量（Aλ₂> Aλ₁，按 2－16 式求 K）。而以 262 nm 和 240 nm 为组合波长测定食品红 2 号（R₂）。

②复方黄连素注射液中甲氧芐氨嘧啶（TMP）含量的系数倍率法测定

硫酸氢黄连素 λ_ma_x＝344 nm。TMP 的 λ_ma_x＝271 nm，测：

⊿A₂7₁（TMP）＝A₂7₁－K•A₃44

释成四种浓度，分别在 271nm 和 344nm 处测定吸光度，并计算K值。然后在 271nm 和 344nm

处测定样品的吸光度值，求出⊿A₂1₁（TMP）。可由标准对照法求出 TMP 含量。

③ 增效联磺胶囊中三组分含量可用双波长系数倍率法测定增效联磺胶囊中含有磺胺

甲基异恶唑（SMZ）、磺胺嘧啶（SD）和甲氧芐氨嘧啶（TMP）。采用亚硝酸钠法测定

 该品中 SMZ、SD 的磺胺总量和提取分光光度测定 TMP 的含量，操作较繁。姚桂棣等

用系数倍率法，并借助微机，可不经分离直接测定各自的含量^[9^]。

分别配制成 SMZ、SD 的乙醇溶液 10ug/ml 和 TMP 的乙醇溶液 4ug/ml 作对照液。然

后配制模拟样品溶液：准确称取 SD、SMZ10mg，放入 100ml 容量瓶中，加 TMP 乙醇对照

溶液 20ml，用乙醇稀至刻度，取此液中 0.1mol/1HCl 稀释 10 倍，然后，以 0.1mol/1HCl 为

参比，对上述对照液和模拟样品液，以⊿λ0.5nm 间隔，从 300－220nm 扫描，求得吸光度值，

经微机处理选出测点：SMZλ₂4₃/λ₂6₅，K＝2.267；SDλ₂3₆/λ₂4₂，K＝1.5381；TMPλ₂40.₅/λ₂5₀，

K＝1.1291。以⊿A＝A₁－KA₂ 为纵坐标，λ 为横坐标作图（见图 15）。当以 236nm 为测定波

长，则⊿A 只与 SD 浓度有关，可测定之。同理可测定 SMZ 和 TMP。增效联磺胶囊同样配

成乙醇溶液，将样品液和对照液在 λ₂3₆/λ₂4₂、λ₂4₃/λ₂6₅、λ₂40.₅/λ₂5₀ 处测其吸光度值，并计算各

组分含量。

紫外可见近红外分光光度计系数倍率法