济南九望紫外可见近红外分光光度计

济南九望紫外可见近红外分光光度计

1、基本工作原理

1）吸收的本质：分光光度法是利用物质对不同波长光的选择吸收特性而建立起

来的分析方法。通常利用棱镜或光栅分光来取得单色光，使单色光连续地依次通

过溶液，并测得该溶液对每一波长的吸收，得到吸收光谱曲线。

 吸收光谱来源于物质对光的选择吸收，这是物质的宏观现象，而吸收的本质

是分子内部运动和光相互作用的结果。当物质的分子吸收一定能量或波长的光谱

后，透过的光谱中有些波长被吸收就形成了吸收光谱。吸收的能量愈小，则相应

的光的波长，吸收峰出现在较长波段。当吸收在红外区时形成红外吸收光谱，如

果吸收能量愈大，则相应的波长愈短，吸收峰出现在较短波段，当吸收在紫外区

产生紫外吸收光谱。

2）吸收定律—朗伯比耳定律：当一束平行单色光通过均匀的溶液时，其吸光度

与溶液的浓度和厚度的乘积成正比。

其数字表达式：A=KCL=LogI0/I=-LogT

吸收定律数字表达式成立的前提：①，入射光为单色光，②，吸收过程中各

物质无相互作用，各物质吸光度具有加和性，③，光与物质的作用*于吸收过

程，没有荧光散射和光化学现象，④，吸收物是一种均匀分布的连续体系，

3）影响分光光度法的原因：

a，辐射与物质的非吸收作用引起的误差，

b，荧光与光化学反应的影响，一般说来，荧光对分光光度测量产生的误差

可以忽略，多数情况下显色体系的荧光效率很小，而且荧光发射是各向同性，只

有一小部分沿着透射光方向进入检测器，使测量吸光度偏低，产生负偏离。荧光

 对吸收测量的影响*程度上决定于仪器的吸收池和检测器光学设计，

 c，反射和散射，吸收定律只适用于均匀介质的吸收体系，浑浊溶液因散射

使实测吸光度增加，导致偏离比耳定律，

d，仪器的非理想性引起的误差，

 e，复色光对比耳定律的偏离，大多数光度计只能获得接近于单色光的狭窄

的光通带，实际上仍是有复色光性质，可导致偏离比耳定律。偏离的大小取决于

二单色光的摩尔吸光系数差△ε，|△ε|很小时，可近似认为是单色光，在低浓

度时，工作曲线仍为直线，但浓度较大时，随浓度增大，A-C曲线弯曲愈严重，

故比耳定律只适用于稀溶液，

f 杂散光，杂散光是指进入检测器的处于待测波长光谱带宽范围外的不需要

的其它波长组分。其主要来源于分光光度计色散元件棱镜或光栅、反射镜、透镜

表面的散射，单色器内壁灰尘及其它元件伤痕的反射和漫射等，杂散光可引起严

重的测量误差。在仪器能量处于小的波长处，杂散光通常处于大值（如氘灯

220nm,钨灯 340nm），

g，狭缝宽度，狭缝宽度不仅影响光谱的纯度，也影响吸光度值。在定量分

析时，为了得到足够的测量信号，应采用较大的狭缝，在定性分析时则采用较小

的狭缝，当出射狭缝和入射狭缝的宽度相等时，狭缝宽度引起的误差小，

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 h，波长标度尺的误差，波长标度尺即仪器的波长准确度，如误差较大或未

作校正，将光谱测量产生误差，即影响吸光度测量的准确度（在吸收光谱的尖峰

处更为显著），

 i，不平行入射光的影响，比耳定律的前提条件之一是采用平行入射光束，

以保证全部光束通过同一厚度的吸收介质，当入射光束偏离平行性较大时，就明

显导致偏离比耳定律。如果仪器中光束中等强度偏离平行性，引起的吸光度测量

误差一般在 0.5%以内；

j，光度标尺的误差，光度标尺即透射比准确度，其误差大小直接影响光度

测量的准确度。

济南九望紫外可见近红外分光光度计