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即用型 PCR 试剂盒 3.01 mL*使用方法:
1. 以 30 uL 的标准 PCR 反应体系为例,如果反应体系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的 PCR 管中,加入下列成分:易错 PCR Mix, 10× 3 uL 易错 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自备 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自备,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 补水到 30 uL
2. 按已经优化的 PCR 条件进行一定循环数的 PCR(循环数与突变率的关系见下表),然后取 5 uL 电泳检查。如果没有优化的 PCR 条件,一般可以先尝试下面的 PCR 条件: PCR 前变性 94℃ 3 分钟易错 PCR 94℃ 1 分钟 45℃ 1 分钟 循环 30 次(见注) 72℃ 1 分钟注:易错 PCR 一般不需要热启动,也不需要在 PCR 结束后做延伸处理。
3. 电泳检测是否得到预计长度的 PCR 产物。
即用型 PCR 试剂盒 3.01 mL*产品及特点:
易错 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校对功能的特性,在一定条件下(如不同的 dNTP 浓度、Mg 浓度和 MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法,则可从构建的突变库选出所需突变体。易错 PCR 和常规 PCR 的比较如下:本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错 PCR 而开发,本产品具有下列特点:
1. 即开即用,十分简单方便,尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的*性。
2. 配方经过精心优化,突变率稳定,突变没有趋向性。易错 PCR 的突变率为 0.66% (±0.13%),详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单,但如果在 PCR 引物中设计位点,则可使产物克隆到表达载体,也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4. 可用于连续易错 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易错 PCR 的产物用作下一次易错 PCR 的模板即可,使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增 1kb 以下的产物,对于 1kb 以上的产物,建议分段扩增。
产品介绍:
规格及成分:
Bacillus schlegelii heterotrophic medium
Caloramator viterbensis medium
Clostridium stercorarium (a-g?) medium
Desulfobacterium catecholicum medium
Desulfuromonas chloroethenica medium
Francisella halioticida medium
Halobacterium medium
Hyphomicrobium medium
Marine ammonium mineral salts
Methanocalculus halotolerans medium
Methylothermus medium青春双歧杆菌 Bifidobacterium adolescentis
黑曲霉 Aspergillus niger
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
PA317(小鼠成纤维细胞)5×106cells/瓶×2
杆菌属 Lactobacillus sp.
菜豆根瘤菌 Rhizobium phaseoli
THP-1(人髓系白血病单核细胞)5×106cells/瓶×2
酸球菌亚种 Lactococcus lactis subsp. lactis
猴菌
球形芽胞杆菌 Bacillus sphaericus
F9(小鼠畸胎瘤细胞)5×106cells/瓶×2
酸球菌亚种 Lactococcus lactis subsp. lactis
苜蓿中华根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
RSC, 大鼠雪旺细胞
宇佐美曲霉 Aspergillus usamii
松塔牛肝菌 Strobilomyces strobilaceus
小鼠白血病细胞英文名称:M1
Saos-2,人成骨肉瘤细胞
解脂亚罗酵母 Yarrowia lipolytica
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
Modified thermus 162 medium
Orotic acid medium
PY+X medium
Roseococcus suduntuyensis medium
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