AP35L144-iFluor 790琥珀酰亚胺酯_染色原料-和元李记（上海）生物技术有限公司

参考价	￥ 3200
订货量	≥1件

染色试剂

荧光染色

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染色原料

供货周期	现货	规格	1mg
货号	AP35L144	应用领域	生物产业

iFluor 790琥珀酰亚胺酯是一系列很棒的荧光标记染料，可以覆盖整个可见光谱。所有iFluor 染料都具有优异的水溶性。它们的亲水性使有机溶剂的使用极小化。iFluor 染料也具有比经典荧光标记染料更好的标记性能，如FITC，TRITC，Texas Red ，Cy3 ，Cy5和Cy7。一些iFluor 染料在某些抗体上明显优于Alexa Fluor 标记染料。

详细介绍

iFluor 790琥珀酰亚胺酯

订购信息

产品名称	货号	规格	价格
iFluor 790琥珀酰亚胺酯	AP35L144	1mg	3200

产品描述

iFluor 染料是一系列很棒的荧光标记染料，可以覆盖整个可见光谱。所有iFluor 染料都具有优异的水溶性。它们的亲水性使有机溶剂的使用极小化。iFluor 染料也具有比经典荧光标记染料更好的标记性能，如FITC，TRITC，Texas Red ，Cy3 ，Cy5和Cy7。一些iFluor 染料在某些抗体上明显优于Alexa Fluor 标记染料。它们是用于标记蛋白质和核酸而不包含性能的极便宜的荧光染料（替代Alexa Fluor 染料）。每种iFluor染料的开发都与特定的Alexa Fluor 或其他标记染料（如DyLight 染料）的光谱特性相匹配。
琥珀酰亚胺基（NHS）酯被证明是用于胺修饰的很棒的试剂，因为形成的酰胺键基本上与天然肽键相同并且稳定。这些试剂通常是稳定的并且与脂族胺显示出良好的反应性和选择性。当琥珀酰亚胺酯化合物用于缀合反应时，需要考虑的因素很少：1溶剂：在大多数情况下，活性染料应溶于无水二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基亚砜（DMSO）中。2：反应pH：胺与琥珀酰亚胺酯的标记反应强烈依赖于pH。胺反应性试剂与非质子化脂族胺基团反应，包括蛋白质的末端胺和赖氨酸的β-氨基。因此，胺酰化反应通常在pH 7.5以上进行。通过琥珀酰亚胺酯进行的蛋白质修饰通常可以在pH 8.5-9.5下进行。3：反应缓冲液：使用胺反应试剂时，必须避免使用含有游离胺（如Tris和gan.an.suan.）和硫醇化合物的缓冲液。广泛用于蛋白质沉淀的铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）也必须在进行染料缀合之前除去（例如通过透析）。4：反应温度：大多数缀合在室温下进行。然而，特定标记反应可能需要升高或降低的温度。
技术资料

1.Ex(nm)：786
2.Em(nm)：811
3.分子量：1768.30
4.溶剂：DMSO
保存方法
-20℃避光长期保存，保质期12个月。
使用方法
1.准备蛋白质储备溶液（溶液A）：
将100μL反应缓冲液（如1 M.tan.suan.钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液，pH~9.0）与900μL目标蛋白溶液（如抗体，蛋白质浓度> 2 mg / ml，如果可能）混合至100μL给予1 mL蛋白质标记原液。
【注】：
1：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0，则使用1M.tan.suan.氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0~9.0的范围。
2：蛋白质应溶解于pH7.2~7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或.gan.an.suan.缓冲液中，则必须用pH7.2~7.4的1X PBS透析，以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。
3：用牛血清白蛋白（BSA）或明胶稳定的不纯抗体或抗体不能很好地标记。 die dan hua na 或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去 die dan hua na 或硫柳汞，以获得很棒的标记结果。
4：如果蛋白质浓度低于2 mg / mL，则结合效率会显着降低。为获得很棒的标记效率，建议极终蛋白质浓度范围为2~10 mg / mL。
2.准备染料储备溶液（溶液B）：
将无水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制备10~20mM储备溶液。通过移液或涡旋混合均匀。
【注】：
在开始缀合前准备染料储备溶液（溶液B）。及时使用。染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。溶液B可在冰箱中保存两周，避光保存。避免冻融循环。
3.确定合适的染料/蛋白质比例（可选）：
【注】：
每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能不利地影响其结合亲和力，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定合适的染料/蛋白质比率。通常，对于大多数染料 - 蛋白质缀合物，推荐使用4-6种染料/蛋白质。
3.1使用10：1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）作为起始点：将5 μL染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入到样品瓶中。蛋白质溶液（95μl溶液A）有效摇动。假设蛋白质浓度为10 mg / mL并且蛋白质的分子量为200KD，蛋白质的浓度为0.05mM。
【注】：
蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10％。
3.2运行缀合反应（参见下面的步骤4）。
3.3重复＃3.2，溶液B /溶液A的摩尔比为5：1;分别为15：1和20：1。
3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。
3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比（DOS）（见说明书）。
3.6运行上述4种结合物的功能测试，确定合适的染料/蛋白质比例，以扩大标记反应。
4.运行缀合反应：
4.1有效加入适量的染料储备溶液（溶液B）到蛋白质溶液（溶液A）的小瓶中晃动。
【注】：
溶液B /溶液的合适摩尔比由步骤3.6确定。如果跳过步骤3，我们建议使用10：1溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比。
4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30~60 min。
5.纯化缀合物
以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 - 蛋白质缀合物的实例。
5.1按照制造说明准备Sephadex G-25色谱柱。
5.2将反应混合物（直接从步骤4）加载到Sephadex G-25柱的顶部。
5.3样品在顶部树脂表面下方运行时立即加入PBS（pH 7.2~7.4）。
5.4向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2~7.4）以完成色谱柱纯化。合并含有所需染料—蛋白质缀合物的级分。
【注】：
1：立即使用时，染料 - 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并等分多次使用。
2：对于长期储存，染料 - 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥

注意事项

1.本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

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