聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒使用说明书
DNA回收试剂盒使用说明书（PAGE回收）

本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和*的缓冲液系统，从聚丙烯酰胺凝胶上回收DNA片段，同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛

选、连接和转化等实验。配以特制的研磨杵和过滤柱，使你的操作更方便。

操作步骤：(所有离心步骤均可使用台式离心机在室温下离心)

*次使用前请先在15ml漂洗液中加入60ml无水乙醇。

1、将单一的目的DNA条带从聚丙烯酰胺凝胶中切下（尽量切除多余部分），放入1.5ml离心管中，称取重量，用研磨杵将胶尽量挤压碎。加入2倍体积的溶胶液吹打混匀（每100mg胶加入200ul溶胶液），75℃水浴30分钟。

2、用1ml的去尖吸头吸取混合物至过滤柱中（将胶一起吸入，溶液过多时可分次加入）。13,000rpm离心1分钟。将收集管中的滤出液转入新离心管。

3、取六倍体积结合液加入原离心管（每100mg胶加入600ul），清洗管壁后加入过滤柱中(溶液过多时可分次加入)，颠倒过滤柱或轻轻吹打几次混匀，13,000rpm离心1分钟。将两次收集的滤出液混合。

4、将总滤出液混匀后加入吸附柱中（溶液过多时可分次加入），13,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放入收集管中。

5、向吸附柱中加入600μl漂洗液（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），13,000rpm离心30-60秒，倒掉废液，将吸附柱重新放入收集管中。

6、向吸附柱中加入600μl漂洗液，13,000rpm离心30-60秒，倒掉废液。

7、将离心吸附柱放回收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂

洗液。将吸附柱开盖置于室温3-5分钟，*晾干，以防止残留的漂洗液影响下一步的实验。

8、将吸附柱放到一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量65–70℃预热的洗脱缓冲液（20-30μl），室温放置2分钟。13,000rpm离心2分钟收集DNA溶液。

注意：①为了增加回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，13,000rpm再次离心1分钟。
      ②洗脱缓冲液体积不应少于20μl，体积过小影响回收效率。
      ③洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5之间。

9、DNA回收产物直接下一步实验或者-20℃保存。

注意事项：

1、电泳时使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。

2、切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。

3、本试剂盒对<50bpDNA片段回收效率偏低（30%左右），如想回

收，应加大结合液的体积，延长吸附和洗脱的时间。

4、回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越

小，回收率越低。