样本收集:依据实验需求,收集适量的人或小鼠血清、血浆、细胞培养上清等样本。血清样本需待血液自然凝固后离心获取;血浆样本则需在采血时加入抗凝剂,随后离心分离;细胞培养上清按标准细胞培养流程收集,并通过离心去除细胞碎片等杂质。收集好的样本要妥善保存,避免反复冻融影响检测结果。
试剂盒准备:从冰箱取出试剂盒,放置在室温(20℃ - 25℃)环境中平衡 30 分钟,让试剂盒内各试剂温度均匀,同时准备好移液器、吸头、酶标仪等实验器材,并确保器材性能正常。
加样:将标准品、待测样本以及空白对照按规定体积准确加入微孔板对应孔中,轻轻振荡使样本与包被抗体充分混匀,随后在设定温度下孵育特定时间。
洗板:孵育结束,弃去孔内液体,用洗涤液充分洗涤微孔板 3 - 5 次,以彻di清除未结合的物质,减少非特异性信号干扰。每次洗涤后需将微孔板拍干,防止残留液体影响后续反应。
加酶标抗体:向各孔加入适量酶标抗体,振荡混匀后再次孵育。
显色与终止:加入底物显色液,在避光条件下孵育,待颜色变化达到理想程度时,加入终止液终止反应,使反应停止在最佳检测状态。
结果测定:立即使用酶标仪在规定波长下测定各孔 OD 值,根据标准曲线准确计算出样本中嗜酸粒细胞趋化因子的含量。
高灵敏度:能够精准检测到极低浓度的嗜酸粒细胞趋化因子,满足对微量样本或低表达水平的检测需求。
特异性强:试剂盒中的抗体对 ECF 具有高度特异性,与其他类似物质几乎无交叉反应,确保检测结果准确可靠。
重复性好:同一批样本多次检测结果稳定,变异系数小,为科研及临床诊断提供了可靠且可重复的数据支持。