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上海宝叶生物科技有限公司
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利用血清筛选噬菌体文库交叉抑制实验
2013-3-16 阅读(1455)
[器材和试剂]
● 多孔板（Immuno plate Maxisorp，Nuno）
● TBS
● PEG—纯化噬菌体
● PBST
● 封闭液（含5％脱脂牛奶，0．05％Tween—20，0．02％NaN3的PBS）
● XLl—Blue细菌提取物
● 碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG（Fc特异性）抗体（Sigma）
● 底物缓冲液（10％二乙醇胺，0．5mmmol/L Mg-2，0．05％NaN3， 用HCl调节至pH 9．8）
● 显色液（在底物缓冲液中加1mg/ml p硝基苯磷酸）
● 自动酶标仪
[方法]
1．将100ul含有2 ×1010个PEG—纯化噬菌体颗粒的TBS，等量分加到多孔板各孔中，4℃孵育12小时。
2．用PBST洗涤数次，在室温下每孔加250/ll封闭液封闭2小时。
3．用封闭液稀释血清，其中含1×1010个/mlMl3噬菌体颗粒、50ul/ml的XLl—Blue细菌提取物以及2×1011个颗粒/ml PEG纯化抑制子噬菌粒克隆， 室温预孵育3小时。
4．除去板中封闭液，将预孵育的血清混合物加到噬菌体包被孔中，并在室温下孵育3小时。
5．用PBST充分洗涤。
6．每孔加100ul碱性磷酸酶标记二抗，用封闭液按l：5000比例稀释，并在室温下孵育2小时。
7，用PBST洗板数次，用底物缓冲液洗涤一次。
8．每孔加入100ul含lmg/ml p硝基苯磷酸的底物缓冲液，以显示碱性磷酸酶反应。
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