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上海宝叶生物科技有限公司
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从外周血淋巴细胞（PBls）中分离RNA
2013-3-9 阅读(1382)
[方法]
1．收集新鲜人血液并立即用Ficoll分离白细胞。
2．用冰冷PBS洗涤外周血淋巴细胞3次。
3．在50ml塑料离心管中收集外周血淋巴细胞，并加入7ml裂解缓冲液（可溶解达到5×108个外周血淋巴细胞），然后剧烈涡旋振荡以溶解细胞。
4．加入7体积（49m1）4m01/L氯化锂，4℃孵育15～20小时（过夜）。
5．将悬液转移到30mlCorex管内，在吊桶式转头内4℃离心2小时，6500r/min。
6．弃去上清，并用Kimwipe擦拭试管口。用3mol/L氯化锂（大约15ml）重悬，收集沉淀.将沉淀重悬液离心，6500r/min 1小时。
7．弃去上清，用2m1RNA溶解液溶解沉淀。在-20℃下，*冷冻悬液。
8．复溶悬液，每10分钟涡旋20秒，共45分钟。
9．用等体积酚抽提1次，并用等体积氯仿抽提1次。
10．加入1/10体积的3mol/L乙酸钠，pH 4．8和2体积一20℃乙醇。*混合溶液，并在-20℃下孵育过夜。
11．在吊桶式转头内离心RNA，12000r/min 30分钟。用0．2m1DEPC处理水重悬沉淀。将溶解的DNA转移至1.5m1微量离心管内，并加入1/10体积3mol/L乙酸钠，pH 4．8和2体积一20℃乙醇，重新沉淀。并以乙醇沉淀物形式保存RNA，直至准备使用时。
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