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在微量滴定板中进行可溶性SCFv ElISA的方法
2012-12-22 阅读(1272)
1．按每孔100pl蛋白抗原包被微量滴定板，4℃过夜。PBS中10ug／m1的浓度是包被抗原的标准浓度。但有时需要更高的浓度或者不同的包被缓冲液（比如碳酸盐缓冲液）。
2．弃去抗原液并用PBS洗涤板孔2次。
3．加入200gl的2％MPBS封闭每个板孔，37℃孵育2小时。
4．用PBS洗涤板孔3次。
5．每孔加入50ul的4％MPBS。
6．每孔加入50ul含可溶性抗体的培养基上清，用移液器反复吹吸混匀，室温孵育1小时。
7．弃去溶液，用PBS／Tween洗涤板孔3次，再用PBS洗涤3次。
8．每孔加入100ul 9E10单抗（用2％MPBS按1：1000稀释）。室温孵育孔板l小时。
9．弃去溶液，用PBS／Tween洗涤板孔3次，再用PBS洗涤3次。
10．每孔加入抗小鼠HRP（用2％MPBS按1：2000稀释）。室温孵育孔板1小时。
11．弃去二抗，并用PBS／Tween和PBS分别洗涤3次。
12．每孔加入100ul TMB系统溶液，并在暗处室温孵育10～30分钟。数分钟内，应呈现蓝色。
13．每孔加入50～100ul终止液，终止反应。
14．在450nm处读板。
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