丙二醛（MDA）含量检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0025
规格：100T/96S
产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：
MDA检测工作液的配制：临用前取1瓶试剂二加入20mL试剂一，溶解混匀，2-8℃保存一个月。MDA检测工作液较难溶解，可以70℃加热，并剧烈振荡以促进溶解，或者通过超声处理以促进溶解。
产品说明：
氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括丙二醛（MDA）。通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平。
丙二醛（MDA）在酸性和高温条件下，可以与硫代巴*（thiobarbituric acid，TBA）缩合，生成棕红色的三甲川（3,5,5-三甲基恶唑-2,4-*酮），其最大吸收波长在532nm。进行比色后可估测样本中MDA的含量。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件

实验实例：

1. 取马血清按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA532=A532_测定-A532_空白=0.078-0.047=0.031，ΔA600=A600_测定-A600_空白=0.053-0.043=0.01，ΔA=ΔA532-ΔA600=0.021按体积计：

MDA含量（nmol/mL）=53.763×ΔA×F =1.129 nmol/mL。

1. 取500万hela细胞，加1mL提取液进行样本处理，离心取上清后按测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA532=A532_测定-A532_空白=0.101-0.046=0.055，ΔA600=A600_测定-A600_空白=0.043-0.043=0，ΔA=ΔA532-ΔA600 = 0.055，按照细菌或细胞数量计算：

MDA含量（nmol/10⁴ cell）=0.1075×ΔA×F =0.006nmol/10⁴ cell

1. 取0.1g 小鼠肝脏，加1mL提取液进行样本处理，离心取上清后按测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA532=A532_测定-A532_空白=0.196-0.047=0.149，ΔA600=A600_测定-A600_空白=0.125-0.043=0.082，ΔA=ΔA532-ΔA600= 0.067，按照样本质量计算：

MDA含量（nmol/g 质量）= 53.763×ΔA÷W×F =36.02 nmol/g 质量

参考文献：
[1] Spitz D R , Oberley L W . An assay for superoxide dismutase activity in mammalian tissue homogenates[J]. Analytical Biochemistry,1989
[2] Masayasu M , Hiroshi Y . A simplified assay method of superoxide dismutase activity for clinical use[J]. Clinica Chimica Acta.
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