谷*酰胺合成酶（GS）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0915
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：
试剂三：临用前取一瓶加入5mL蒸馏水充分溶解备用，用不完的试剂-20℃分装可保存4周，避免反复冻融。
产品说明：
GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物体内氨同化的关键酶之一，催化铵离子和谷*酸合成谷*酰胺，不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性，而且谷*酰胺也是氨的主要储存和运输形式。
GS在ATP和Mg²⁺存在下，催化铵离子和谷*酸合成谷*酰胺；谷*酰胺进一步转化为γ-谷氨酰基异羟肟酸，在酸性条件下与铁形成红色的络合物；该络合物在540nm处有最大吸收峰，可用分光光度计测定。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞破碎仪、冰和蒸馏水。

操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件

实验实例：

1. 称取0.125g 小鼠肾脏，加入1mL提取液进行冰浴匀浆，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算∆A=A测定-A对照=0.228-0.07=0.158，带入公式计算：

GS（U/g 质量）=38×ΔA÷W =48.032 U/g 质量。

1. 称取0.110g 小鼠肝脏，加入1mL提取液进行冰浴匀浆，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算∆A=A测定-A对照=0.76-0.067=0.693，带入公式计算：

GS（U/g 质量）=38×ΔA÷W =239.4 U/g 质量。

1. 称取0.158g 黄豆芽，加入1mL提取液进行冰浴匀浆，按照测定步骤操作，用96孔板测得计算∆A=A测定-A对照=0.142-0.089=0.053，带入公式计算：

GS（U/g 质量）=38×ΔA÷W =12.747 U/g 质量。
相关发表文献：

1. Zhao B, Tian M, An Q, et al. Characteristics of a heterotrophic nitrogen removal bacterium and its potential application on treatment of ammonium-rich wastewater[J]. Bioresource technology, 2017, 226: 46-54.

2. Su Yilu,Zhou Zhi,Yu Xiaopeng．Possible roles of glutamine synthetase in responding to environmental changes in a scleractinian coral[J]．Molecular biology reports,2018,45(6).

3. Fei Ding,Qiannan Hu,Meiling Wang,Shuoxin Zhang．Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants[J]．International Journal of Molecular Sciences,1999,19(12):4046.

4. Jie Wang,Wei Zhou,Hui Chen,Jiao Zhan,Chenliu He,Qiang Wang．Ammonium Nitrogen Tolerant Chlorella Strain Screening and Its Damaging Effects on Photosynthesis[J]．other,-1,9(-1):3250.

5. Shan Li,Yonghang Tian,Kun Wu,Yafeng Ye,Jianping Yu,Jianqing Zhang,Qian Liu,Mengyun Hu,Hui Li,Yiping Tong,Nicholas P. Harberd,Xiangdong Fu．Modulating plant growth-metabolism coordination for sustainable agriculture[J]．other,-1,560(7720):595–600.

参考文献：

1. Haghighat N. Estrogen (17β-Estradiol) enhances glutamine synthetase activity in C6-glioma cells[J]. Neurochemical research, 2005, 30(5): 661-667.

2. Bressler S L, Ahmed S I. Detection of glutamine synthetase activity in marine phytoplankton: optimization of the biosynthetic assay[J]. Mar. Ecol. Prog. Ser, 1984, 14: 207-217

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