细胞铁含量检测试剂盒说明书

微量法

货号：BC5315

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制： 

1. 标准液：1 μmol/mL Fe³⁺标准液，临用前取100μL 1μmol/mL Fe³⁺标准液，加入100μL蒸馏水，充分混匀，配制成0.5μmol/mL标准液使用，现用现配。（实验中每管需要20μL，为减小实验误差，故配制大体积。）

产品说明：

铁元素是人体必须的微量元素之一，它是血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素及其他酶系统的主要成分，帮助氧的运输，促进脂肪氧化。缺乏铁元素容易造成贫血、代谢纷乱，并影响机体的免疫功能。

盐酸羟胺将样本中的Fe³⁺还原成Fe²⁺，Fe²⁺在弱酸条件下与邻菲罗啉形成橙红色配合物，在510nm处有吸收峰，测定该波长吸光度即可计算铁含量。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、可调式移液器、超声破碎仪、微量玻璃比色皿/96孔板、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

按照细胞数量（10⁴个）︰提取液体积（mL）为500~1000︰1的比例（建议500万细胞加入0.5mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率200W，超声3秒，间隔7秒，重复30次），于4℃，8000g离心10min，取上清待测。

若样本为真菌、细菌等有细胞壁的微生物可以适当延长超声时间。

二、测定步骤

1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至510nm，分光光度计蒸馏水调零。

2. 在1.5mLEP管/96孔板按下表步骤加样：

三、细胞铁含量计算

1. 按细胞数目计算：

细胞铁含量（ng/10⁴ cell） =（C标准液×ΔA测定÷ΔA标准）×V提取×10³×55.845÷500

=27.922×ΔA测定÷ΔA标准

2. 按蛋白浓度计算：

细胞铁含量（ng/mg prot） =（C标准液×ΔA测定÷ΔA标准）×V提取×10³×55.845÷（Cpr×V提取）

= 27922.5×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr

C标准液：0.5μmol/mL Fe³⁺标准液；V提取：加入提取液体积，0.5mL；10³：单位换算系数，1μmol=10³nmol；55.845：Fe的相对原子质量，55.845ng/nmol；500：细胞数目，500万；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL。

注意事项：

1、 如果ΔA测定＜0.01，可适当加大样本量后重新测定；如果测定管吸光值大于0.8，建议将样本用蒸馏水适当稀释后进行测定。注意同步修改计算公式。

2、 如果按蛋白浓度计算细胞铁含量，需自行测定样本上清蛋白浓度。

实验实例：

1、 取500万细胞加入0.5mL提取液进行超声破碎提取，离心取上清后按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA测定=A测定-A空白=0.100-0.048=0.052，ΔA标准=A标准-A空白=0.408-0.048=0.360，按细胞数目计算含量得：

细胞铁含量（ng/10⁴ cell）=27.922×ΔA测定÷ΔA标准 =4.033 ng/10⁴ cell

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