高铁血红蛋白（MetHb）含量检测试剂盒说明书

可见分光光度法

货号：BC5600

规格：50T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 标准品：临用前加入1mL蒸馏水充分溶解，即为10mg/mL血红蛋白标准品，2-8℃可保存4周。

2. 0.625 mg/mL标准品配制：取50μL 10mg/mL血红蛋白标准品，加入750μL蒸馏水，充分混匀，配制成0.625mg/mL的血红蛋白标准品使用，现配现用。

产品说明：

高铁血红蛋白（Methemoglobin，MetHb）为血红蛋白的氧化物，是血红蛋白分子内的亚铁离子被氧化成三价铁离子形成的。血红蛋白具有携氧能力，氧化后的高铁血红蛋白失去携氧能力，测定高铁血红蛋白含量可以衡量血液及红细胞代用品携氧能力，其测定方法对临床诊断高铁血红蛋白血症和研制红细胞代用品具有重要意义。

血红蛋白与氧结合形成氧合血红蛋白，脱氧后为脱氧血红蛋白，分别测定氧合血红蛋白、脱氧血红蛋白和高铁血红蛋白在560nm、576nm、630nm处的吸光值，利用各组分在特定波长的消光系数，可计算各组分的质量浓度百分比，再测出样本的总血红蛋白含量，即可计算得到样本的高铁血红蛋白含量。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、低温离心机、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、冰和蒸馏水。

操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件

注意事项：

1. 如果A总大于1.0，建议将样本用蒸馏水稀释后进行测定，计算公式中注意同步修改。

2. 如果A总小于0.01或接近空白管吸光值，可适当增大样本量，空白管和标准管也需要进行相应调整。

实验实例：

1. 将兔红细胞，用蒸馏水稀释100倍后测定总血红蛋白含量，不稀释直接测定A560、A576、A630，用1mL玻璃比色皿测得并计算ΔA总=A总-A空白=0.537-0.007 =0.530，ΔA标准= A标准-A空白=0.369-0.007=0.362；A560=0.741，A576=1.218，A630=0.104；计算：

（1）总血红蛋白含量（mg/mL）= 0.625×ΔA总÷ΔA标准×F=91.51 mg/mL

（2）MetHb（%）=0.2380÷（0.2380+0.6509+0.0329）×100%=25.82%

（3）高铁血红蛋白含量（mg/mL）=总血红蛋白含量×MetHb（%）=23.627mg/mL

2. 将兔全血，用蒸馏水稀释160倍后测定总血红蛋白含量，不稀释直接测定A560、A576、A630，用1mL玻璃比色皿测得计算ΔA总=A总-A空白= 0.570-0.007 =0.563，ΔA标准= A标准-A空白=0.369-0.007=0.362；A560=1.111，A576=1.650，A630=0.072，计算：

（1）总血红蛋白含量（mg/mL）= 0.625×ΔA总÷ΔA标准×F=155.525 mg/mL

（2）MetHb（%）=0.084÷（0.2402+0.8292+0.0840）×100%=7.283%

（3）高铁血红蛋白含量（mg/mL）=总血红蛋白含量×MetHb（%）=11.33mg/mL

3. 将小鼠全血，用蒸馏水稀释160倍后测定总血红蛋白含量，不稀释直接测定A560、A576、A630，用1mL玻璃比色皿测得并计算ΔA总=A总-A空白= 0.787-0.007=0.780，ΔA标准= A标准-A空白=0.369-0.007=0.362；A560=1.518，A576=1.821，A630=0.373，计算：

（1）总血红蛋白含量（mg/mL）= 0.625×ΔA总÷ΔA标准×F=215.47 mg/mL

（2）MetHb（%）=0.8201÷（0.4564+0.5931+0.8201）×100%=43.86%

（3）高铁血红蛋白含量（mg/mL）=总血红蛋白含量×MetHb（%）=95.51mg/mL

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