血氨含量检测试剂盒说明书

微量法

注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC4385

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂一：临用前根据样本量按照试剂一A液：试剂一B液=100μL：400μL（共0.5mL，约5T）的比例进行配制，现配现用；

2、 标准品：100μmol/mL 氨标准液；

3、 2μmol/mL 氨标准液：临用前吸取20μL 100μmol/mL 氨标准液和980μL蒸馏水混合均匀配制成2μmol/mL 氨标准液备用，作为标准管标准溶液使用。

产品说明：

血氨主要来源是内源性氨和外源性氨。氨在血中保持恒定状态，即血氨的来源和去路保持动态平衡。氨是有毒物质，主要在肝脏进行代谢解毒。当肝功能严重损害时，氨不能被解毒。氨在中枢神经系统聚集，从而导致肝性脑病。

本法根据氨的靛酚蓝反应原理，通过蛋白沉淀剂将血清（浆）中蛋白沉淀后，利用酚-次氯酸盐直接显色法测定血氨，生成的蓝色靛酚和氨的浓度成正比，在630 nm处有特殊吸收峰，据此可由吸光值计算出样本中血氨的含量。本试剂盒可测各种动物血清（浆）等样本中血氨的含量，样本禁止溶血。柠檬酸钠、肝*钠、EDTA等抗凝剂对实验均无影响。

技术指标：

低检出限：0.0251 μmol/mL

线性范围：0.0625-6 μmol/mL

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、蒸馏水、EP管。

操作步骤：

一、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30 min以上，调节波长至630 nm，分光光度计蒸馏水调零。

2、 操作表：（在1.5 mL EP管中操作）

二、血氨含量计算

血氨含量（μmol/mL）= C标准×ΔA÷ΔA标准×V样÷V样= 2×ΔA÷ΔA标准

V样：加入的样本体积，0.04mL；C标准：标准溶液浓度，2μmol/mL。

注意事项：

1. 试剂一配制后尽快使用，若发现变色则不能使用。

2. ΔA若小于0.01，建议增加量，同时减少提取液体积（如80μL血清（浆）+160μL提取液）；若ΔA若大于1.0，建议减少样本量，同时提高提取液体积或者稀释上清液进行测定，注意同步修改计算公式或者乘以稀释倍数。

3. 所用器材和取血装置均应无氨；采血后应立即测定，不能立即测定2-8℃可保留2h；样本禁止溶血。

实验实例

取马血清按照测定步骤操作，使用96孔板测得计算ΔA= A测定管-A空白管=0.256-0.056=0.200，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.386-0.056=0.330，计算含量得：

血氨含量（μmol/mL）=2×ΔA÷ΔA标准=1.212 μmol/mL。

取胎牛血清按照测定步骤操作，使用96孔板测得计算ΔA= A测定管-A空白管=0.224-0.056=0.168，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.386-0.056=0.330，计算含量得：

血氨含量（μmol/mL）=2×ΔA÷ΔA标准=1.018 μmol/mL。

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