目录:北京索莱宝科技有限公司>>生化检测试剂盒-微量法>>微量法生化试剂盒>> BC4195-100T/96S维生素B1（VB1）含量检测试剂盒 微量法
| CAS | 详询 | 纯度 | 详询 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 详询 | 分子式 | 详询 |
| 供货周期 | 现货 | 规格 | 100T/96S |
| 货号 | BC4195 | 应用领域 | 环保,化工,生物产业,农林牧渔,综合 |
| 主要用途 | 维生素B1(VB1)含量检测 |
维生素B1（VB1）含量检测试剂盒说明书
微量法
货号: BC4195
规格: 100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 提取液 | 液体70 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 稀释液 | 液体100 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂一 | 液体2.5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂二 | 液体3 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂三 | 液体3 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂四 | 液体7 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂五 | 液体4 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 标准品 | 粉剂×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、提取液：内含不溶物，使用前摇匀；
2、标准品：10mg维生素B1。临用前加入1mL稀释液，配成10mg/mL（即10000µg/mL）的标准液。
产品说明：
维生素B1（Vitamin B1）又称硫胺素，以辅酶形式参与糖的分解代谢，在生物体能量代谢中有重要的作用。
VB1在碱性条件下还原铁*生成亚铁*，亚铁*与Fe3+在弱酸条件下生成普鲁士蓝，测定布鲁士蓝在704nm下的特征吸收峰，即可反映VB1的含量。
技术指标：
低检出限：0.057 µg/mL
线性范围：1.953-250 µg/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰和蒸馏水。
操作步骤：
样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织：将样本磨碎，按照质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入0.6mL提取液）加入提取液，60℃浸提30min，加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，13000g离心10min，取上清测定（动物组织、豆类种子等蛋白含量较高的样本建议离心20-30分钟或反复离心2-3次至上清无浑浊）。
2、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入0.6mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，13000g离心10min，取上清测定。
3、液体：直接检测。
二、测定步骤
分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至704nm，分光光度计蒸馏水调零。
将10mg/mL（10000µg/mL）标准液用稀释液稀释为250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125μg/mL的标准溶液备用。
标准品稀释表
| 序号 | 稀释前浓度（µg/mL） | 标准液体积（µL） | 稀释液体积（µL） | 稀释后浓度（µg/mL） |
| 1 | 10000 | 25 | 975 | 250 |
| 2 | 250 | 200 | 200 | 125 |
| 3 | 125 | 200 | 200 | 62.5 |
| 4 | 62.5 | 200 | 200 | 31.25 |
| 5 | 31.25 | 200 | 200 | 15.625 |
| 6 | 15.625 | 200 | 200 | 7.8125 |
实验中每个标准管需25µL标准溶液。
操作表（在1.5mL EP管中进行下列操作）：
| 测定管 | 标准管 | 空白管 | |
| 样本（µL） | 25 | - | - |
| 稀释液（µL） | - | - | 25 |
| 标准品溶液（µL） | - | 25 | - |
| 试剂一（µL） | 20 | 20 | 20 |
| 试剂二（µL） | 25 | 25 | 25 |
| 充分混匀，80℃水浴反应30min。 | |||
| 试剂三（µL） | 20 | 20 | 20 |
| 试剂四（µL） | 55 | 55 | 55 |
| 试剂五（µL） | 30 | 30 | 30 |
| 蒸馏水（µL） | 75 | 75 | 75 |
| 充分混匀，反应5min，吸取200μL于微量玻璃比色皿或96孔板中测定704nm处吸光值A，计算ΔA=A测定管-A空白管，ΔA标准=A标准管-A空白管（空白管只需做1-2次）。 | |||
三、维生素B1含量计算
1、标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA带入方程得x（μg/mL）。
2、维生素B1含量的计算：
（1）按蛋白浓度计算：VB1（μg/mg prot）=x×V样总÷（Cpr×V样总）= x÷Cpr
（2）按样本质量计算：VB1（μg/g 质量）=x×V样总÷W = x÷W
（3）按照细胞数量计算：VB1（μg/104 cell）= x×V样总÷细胞数量（万个）= x÷细胞数量（万个）
（4）按液体体积计算：VB1（μg/mL）= x
V样总：样本总体积，1mL； Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
注意事项：
如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
蛋白浓度较高的样本，比如动物组织，豆类种子等建议将样本稀释20倍或40倍后再测定并在计算公式中乘以稀释倍数。
显色完成后立即进行测定，若显色完成后有沉淀产生，将其摇匀后测定。
实验实例：
称取0.1g肝脏，加入0.6mL提取液，60℃浸提30min，加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，13000rpm离心10min，取上清，将上清稀释40倍之后按照测定步骤操作，使用96孔板测得计算ΔA= A测定管-A空白管=0.551-0.107=0.444，带入标准曲线y=0.0054x+0.0043，计算x=81.43μg/mL，按样本质量计算VB1含量得：
VB1（μg/g质量）= x×V样总÷W×40（稀释倍数）=81.43×1÷0.1×40=32572 μg/g 质量。
称取0.1g稗草，加入0.6mL提取液，60℃浸提30min，加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，13000rpm离心10min，取上清，将上清稀释40倍之后按照测定步骤操作，使用96孔板测得计算ΔA= A测定管-A空白管=0.727-0.107=0.62，带入标准曲线y=0.0054x+0.0043，计算x =114.02 μg/mL，按样本质量计算VB1含量得：
VB1（μg/g质量）= x×V样总÷W×40（稀释倍数）=114.02×1÷0.1×40=45608 μg/g 质量。
相关系列产品：
BC2110/BC2115 维生素B6（VB6）含量检测试剂盒
BC1420/BC1425 维生素E（VE）含量检测试剂盒
维生素B1（VB1）含量检测试剂盒 微量法 维生素B1（VB1）含量检测试剂盒 微量法
16
化工仪器网