酸性转化酶（AI）活性检测试剂盒说明书
微量法
货号：BC0565
规格：100T/48S
产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：
1、试剂二：临用前加入20mL试剂一充分溶解备用；用不完的试剂2-8℃保存；
2、标准品：10mg葡萄糖，临用前加入1mL蒸馏水溶解，制备10mg/mL葡萄糖标准液备用。
产品说明：
蔗糖转化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH，Ivr分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型。AI(EC 3.2.1.26)主要存在于细胞液泡或自由空间中，最适 pH 为4.5~5.0（酸性），通过降解液泡中蔗糖，调节液泡中蔗糖的利用和果实内糖类的积累。
AI催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在540nm有特征光吸收，在一定范围内540nm光吸收增加速率与AI活性成正比。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件   注意事项：
1、如果加入试剂三，煮沸10min后有混浊物出现，建议离心除去沉淀后，取上清测定吸光度；
2、如果吸光值大于1，可以用蒸馏水将样本稀释后测定（计算公式中乘以相应稀释倍数）。
3、由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约1mg/mL），所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。
实验实例：

1. 取0.1g木槿加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清用蒸馏水稀释2倍后按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA测定=0.574，ΔA对照=0.378，ΔA=A测定-A对照=0.574-0.378=0.196，带入标准曲线y=0.7408x - 0.0289，计算x=（0.196+0.0289）/0.7408=0.304，按样本质量计算酶活得：

AI活性（U/g质量）＝33.3×x÷W×稀释倍数＝33.3×0.304÷0.1×2=202.46 U/g 质量。
参考文献：

1. Huang Y W, Nie Y X, Wan Y Y, et al. Exogenous glucose regulates activities of antioxidant enzyme, soluble acid invertase and neutral invertase and alleviates dehydration stress of cucumber seedlings[J]. Scientia horticulturae, 2013, 162: 20-30.

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