土壤有效硼含量检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC3025
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前加入12mL蒸馏水充分溶解备用，用不完的试剂可以2-8℃保存四周；

2. 试剂三：临用前取1瓶加入6mL蒸馏水充分溶解备用，用不完的试剂可以2-8℃保存一周；

3. 试剂五：临用前取1瓶加入2mL蒸馏水充分溶解，再加入0.5mL试剂三混匀，用不完的试剂可以2-8℃保存二周；

4. 标准品：10mg硼酸。临用前加入0.81mL蒸馏水充分溶解，配制成200μmol/mL标准溶液待用，用不完的试剂2-8℃可保存两周。

产品说明：
硼是植物正常发育的微量元素，能够促进植物生长茂盛和生殖器官的正常发育。根据土壤有效磷含量，合理供给硼元素是提高作物产量和品质的关键措施之一。
硼与甲亚胺在弱酸条件下形成棕黄色配合物，在420nm有特征吸收峰，即可计算土壤有效硼含量
技术指标：
低检出限：0.0141μmol/mL
线性范围：0.015625-2μmol/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵、冰、蒸馏水、30-50目筛。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件

• 样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可参考文献）

1. 新鲜土样自然风干或37℃烘箱烘干，过30-50目筛。

2. 按照土壤质量（g）：蒸馏水体积（mL）为1：5-10的比例（建议称取约0.2g土样，加入1mL蒸馏水）加入蒸馏水，沸水中浸提10min。

3. 自然冷却至室温，加入50μL试剂一，震荡5min。

4. 加入100μL试剂二，震荡3min。

5. 加入100μL试剂三，充分震荡褪去紫色。

6. 8000g，25℃离心10min，取上清液待测。

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至420nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2. 标准液的稀释：将200μmol/mL标准液用蒸馏水倍比稀释至1.5、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125μmol/mL的标准液备用，标准液稀释可参考下表：

备注：实验中需标准品40µL。

1. 样本测定：

三、土壤有效硼的计算

1. 标准曲线的绘制：

以标准品的浓度为x轴（x，μmol/mL），各个标准溶液对应的吸光度为y轴（y，ΔA标准），绘制标准曲线，建立标准方程y=kx+b，将ΔA（y，ΔA测定）带入方程得到x（μmol/mL）。

1. 土壤有效硼计算：

有效硼含量（mg/kg土样）=10.81×x×V样总÷1000÷（W÷1000）=13.51×x÷W
W：样本质量，g；V样总：样本总体积，1.25mL；10.81：硼分子量，10.81μg/μmol；1000：单位换算系数，1mmol=1000μmol，1kg=1000g。


注意事项：

1. 显色时严格控制温度并且避光，以免显色剂见光分解。

2. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

实验实例：

1. 取约0.2g处理好的土样，加入1mL蒸馏水，按照样本处理步骤操作，离心取上清之后按照测定步骤操作，使用96孔板测得计算ΔA测定=A测定管-A空白管=0.210-0.146=0.064，带入标准曲线y=0.9827x+0.0033，得出x=0.0618，按计算公式计算有效硼含量得：

有效硼含量（mg/kg土样）=13.51×x÷W=13.51×0.0618÷0.2=4.1746mg/kg土样。
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