单脱氢抗坏血酸还
原酶（MDHAR）活性检测试剂盒说明书
微量法
货号：BC0655
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：
1、试剂二：临用前加入2 mL蒸馏水充分溶解，2-8℃保存；
2、试剂三：临用前加入3.33 mL蒸馏水充分溶解待用，可溶解后分装-20℃保存，避免反复冻融；
3、试剂四：液体置于试剂瓶内EP管中。临用前加2 mL试剂一充分溶解，可溶解后分装-20℃保存，避免反复冻融。
产品说明：
MDHAR催化MDHA还原生成AsA，在抗坏血酸氧化还原代谢中具有重要作用。
MDHAR催化NADH还原MDHA生成AsA和NAD⁺，NADH在340 nm有特征吸收峰，但是NAD⁺没有。通过测定340nm光吸收下降速率，来计算出MDHAR活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
研钵/匀浆器、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪和双蒸水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
实验实例：

1. 取0.1g橙子果肉加入1mL提取液进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上，按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算ΔA测定管=A1测定-A2测定=0.8701-0.8396=0.0305，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.5515-0.5474=0.0041，按样本质量计算酶活得：MDHAR活性 (U/g 质量) =0.268×(ΔA测定管-ΔA空白管)÷W=0.268×（0.0305-0.0041）÷0.1=0.070752 U/g 质量。

注意事项：

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2. 当ΔA测定大于0.3时（96孔板ΔA测定大于0.2），建议客户稀释样本或者调整试剂一和上清液的比例（如将400μL试剂一+300μL上清液改为600μL试剂一+100μL上清液）后进行测定。

3. 当ΔA测定过小时，建议客户提高样本量或者调整试剂一和上清液的比例（如将400μL试剂一+300μL上清液改为200μL试剂一+500μL上清液）。

4. 当A1大于1.5时（酶标仪测定时A1大于2时），建议将样本稀释进行测定。

5. 空白管为检测各管试剂组份的检测孔，正常情况下，其OD值在0.5左右（96孔板在0.3左右），变化不超过0.01。

6. 由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约1mg/mL），所以在测定样品蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。

7. 
   

相关发表文献：

1. Yali Zhou,Sufang Huo,Liting Wang,et al. Exogenous 24-Epibrassinolide alleviates oxidative damage from copper stress in grape (Vitis vinifera L.) cuttings. Plant Physiology and Biochemistry. September 2018;(IF3.404)

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