超氧阴离子
含量检测试剂盒说明书
 微量法
货号：BC1295
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂四：自备氯仿；

2. 标准品：10μmol/mL亚* 酸钠。

产品说明：
生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。
超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO₂^-，NO₂^-在对氨 基苯磺酰胺和萘乙二 胺盐酸盐的作用下，生成紫红色的偶氮化合物，在530nm有特征吸收峰，根据A₅₃₀值可以计算样本中O₂^－含量。
技术指标：
低检出限：0.001451 μmol/mL
线性范围：0.0019-0.5 μmol/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、研钵/匀浆器、微量玻璃比色皿/96孔板、氯仿和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项：

1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

2. 样本制备好后，立刻进行测定，请勿将样本进行长时间的低温保存，以免影响测定结果。

3. 试剂四有一定的毒性，请操作时做好防护措施。

实验实例：

1. 取0.1g小鼠肝脏加入1mL提取液充分研磨，12000rpm，4℃，离心20min，取上清之后按照测定步骤操作，使用96孔板测得计算∆A样本=A测定管-A空白管=0.176-0.043=0.133，标准曲线y=2.9968x+0.0129，计算x=0.04，按样本质量计算酶活得：

超氧阴离子含量（μmol/g 质量）=2x÷W=0.8 μmol/g 质量。

1. 取0.1g树叶加入1mL提取液充分研磨，12000rpm，4℃，离心20min，取上清之后按照测定步骤操作，使用96孔板测得计算∆A样本=A测定管-A空白管=0.091-0.043=0.048，标准曲线y=2.9968x+0.0129，计算x=0.012，按样本质量计算酶活得：

超氧阴离子含量（μmol/g 质量）=2x÷W=0.24 μmol/g 质量。
相关发表文献：

1. Bingbing Cai,Qiang Li,Fengjiao Liu,et al. Decreasing fructose-1,6-bisphosphate aldolase activity reduces plant growth and tolerance to chilling stress in tomato seedlings. physioogia plantarum. December 2017;

2. Zhongyuan Liu,Peilong Wang,Tengqian Zhang,et al. Comprehensive analysis of BpHSP genes and their expression under heat stresses in Betula platyphylla. Environmental and Experimental Botany. August 2018;(IF3.712)

参考文献：

1. 王爱国, 罗广华. 植物的超氧物自由基与羟胺反应的定量关系[J]. 植物生理学通讯, 1990, 6(3): 55-57.

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