利用血管紧张素I提取比较传统的SPE柱与磁性萃取剂的性能

检测样品：血管紧张素I

检测项目：固相萃取

方案概述：血管紧张素!（Ang I）是较为常见的临检标志物之一，通过对血管紧张素提取效果的汉试，能够有效地评价各种样品前处理手段的临床适用性和技术性能。本文通过对比市售的某著名进口品牌HLB 96位SPE多孔板和HLB磁性SPE萃取剂提取Ang I试验的各项方法学指标，直观地比较了两者的性能表现。也为临床SPE样品前处理技术的发展前景提供了非常有价值的参考。

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更新时间2022年05月11日

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利用血管紧张素I的提取比较传统SPE柱与磁性萃取剂的性能

关键词

血管紧张素I，液相色谱质谱，固相萃取，Angiotensin I，Ang I，Renin，LC-MS/MS，SPE

前言

血管紧张素I（Ang I）是较为常见的临检标志物之一，通过对血管紧张素I提取效果的测试，能够有效地评价各种样品前处理手段的临床适用性和技术性能。

本文通过对比市售的某有名的进口品牌HLB 96位SPE多孔板和HLB磁性SPE萃取剂提取Ang I试验的各项方法学指标，直观地比较了两者的性能表现。也为临床SPE样品前处理技术的发展前景提供了非常有价值的参考。

实验设计

如下表所示，使用1% BSA制备四个浓度水平的Ang I系列标准溶液，辅以稳定同位素标记的Ang I内标。

Ang I	浓度（ng）	内标浓度（ng）
LOQ	0.5	10
低水平（L）	7.5	10
中水平（M）	30	10
高水平（H）	80	10

设定如下条件的SPE，应用于某著名进口品牌HLB 96位SPE多孔板。使用适配的正压96孔SPE操作装置运行样品。

名称	操作
活化	使用500 μL甲醇活化SPE板两次
平衡	使用500 μL5%甲酸水溶液活化SPE板两次
上样	取500 μL LOQ、低（L）、中（M）、高（H）上样
淋洗1	使用500 μL5%甲酸水溶液淋洗SPE板两次
淋洗2	使用500 μL20%甲醇水溶液淋洗SPE板两次
洗脱	每孔各加入250 μL甲醇，收集洗脱液于96孔板中

与此对应的，为AUTO M32全自动萃取仪设定如下的程序运行样品，每个样品使用2mg HLB磁性萃取剂。

指令	溶液	孔位	溶剂量（μL）
活化	甲醇	1	500
平衡	5%甲酸水溶液	2	500
上样	样品溶液	3	500
淋洗1	5%甲酸水溶液	4	500
淋洗2	20%甲醇水溶液	5	500
洗脱	甲醇	6	250
排废	/	2	600

数据和比较

将实验设计中所述的四个标准样本，每个样品重复三次提取，比较两种前处理方法提取后，在LC-MS/MS上测得的相对标准偏差，结果如下图所示。其中，左侧蓝色柱为使用某著名进口品牌HLB 96位SPE多孔板提取后的测定结果，右侧橙色柱为使用磁性萃取剂提取后的测定结果。


	图b，低水平（L）重现性

可以看到，两种前处理方法无论在外表峰面积、内标峰面积、计算浓度上的相对标准偏差均没有显著的差别，但是磁性萃取剂的结果在大多数水平下都略好于传统的96位SPE多孔板。

在提取率的比较中，我们选择某著名进口品牌HLB 96位SPE多孔板提取后测得的峰面积为基准（100%），以磁性萃取剂提取后测得的峰面积与之比较。如下图所示，左侧蓝色柱为使用某著名进口品牌HLB 96位SPE多孔板提取后的测定结果，右侧橙色柱为使用磁性萃取剂提取后的测定结果。

最后如下图展示的LOQ水平两种方法提取后，在LC-MS/MS所得的MRM色谱图。图a为使用传统的96位SPE多孔板所得色谱图，图b为磁性萃取剂所得色谱图。可以看到，在所有浓度水平下，磁性萃取剂提取测得峰面积均显著地好于传统的96位SPE多孔板，且均超过后者50%以上，最高甚至达到了约1.8倍。

结果讨论
明显地，在LOQ水平下，磁性萃取剂提取得到的色谱峰高超过了传统的96位SPE多孔板提取，这与提取率结果是*一致的。

通过上述数据比较，我们可以得到如下表所述的结果。

	绝对重复性	相对重复性	提取率	LOQ质量	操作模式
某著名进口品牌96位SPE多孔板	较佳	较佳	适中	适中	手动+负压装置
磁性萃取剂	较佳	较佳	优50%以上	较佳	少量手动+自动设备