颗粒特异性定量策略在细胞外囊泡分析中的应用

血浆来源细胞外囊泡（Extracellular Vesicles，EVs）在肿瘤早筛、疾病监测和生物标志物研究中展现出巨大潜力。但是，在纯化后的血浆和血清样本中，真正的EV颗粒仅占全部纳米颗粒的一部分，其他大量纳米颗粒其实是脂蛋白和蛋白聚集体等杂质颗粒。这些杂质颗粒的粒径与 EV粒径接近，且数量巨大，会严重干扰EV的检测和定量分析。所以，针对纯化后的EV样品，如果仅仅靠纳米颗粒的粒径大小和数量浓度进行分析，这些占比较高的非 EV 颗粒，会严重干扰真实的EV信号，导致EV浓度评估和下游分析结果不准确。要获得可靠、可重复、可比较的 EV 数据，研究人员亟需一套能够有效去除杂质并实现 EV 特异性定量检测的完整解决方案。

Particle Metrix ZetaView® Evolution 纳米颗粒分析平台，联合高纯度 Apex SEC 色谱柱，构建了一套面向血浆 EV 的一体化分析流程：

·Apex SEC 柱：结合常规SEC特点和颗粒相互作用性质，能高效去除脂蛋白和蛋白聚集体，显著提升 EV 纯度。

·ZetaView® Evolution：可同步测量所有纳米颗粒与 EV 特异性的纳米颗粒，实现真正“看得见、数得准”的 EV 定量。

该解决方案帮助研究人员将“颗粒数量”转化为“真实EV数量”，能显著提升 EV 数据的可信度。

如下图所示是用三种不同型号（4B、6B、MM）的Apex SEC色谱柱分别纯化血浆来源的EV，然后用膜染料CMDR（CellMaskTM Deep Red，Thermo Fisher Scientific）标记每一份纯化后的样品，在ZetaView Evolution的散射光模式和荧光模式下分别测试每个样品。下图中，灰色柱状图分别代表散射光模式下测得的所有颗粒的总浓度，红色柱状图分别代表在荧光模式下测得的荧光颗粒浓度。

由以上数据，我们可以很明显地看到，同一样品，借助不同型号的SEC色谱柱进行纯化，所得EV样品的产量和纯度也是有所不同的。如果用不同原理的技术手段分离、纯化细胞外囊泡样品，那EV样品之间的真实信息差异会更大。

因此，在EV研究和实际转化应用中，要获得准确的样品信息，高纯度的分离方案和准确稳定地特异性检测手段都是至关重要的。