牛焦虫病抗体（PIR-Ab）ELISA检测试剂盒

牛焦虫病抗体（PIR-Ab）ELISA检测试剂盒

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：2-8℃。

2．有效期：6个月

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被焦虫病抗原的微孔中，依次加入标本、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻-底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中焦虫病抗体（PIR-Ab）的存在与否。

试剂盒组成

名称96孔配置48孔配置备注

微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无

阴性对照0.5mL 0.5mL 无

阳性对照0.5mL 0.5mL 无

检测抗体-HRP10mL5mL无

20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释

样本-稀释液6mL3mL无

底物A6mL3mL无

底物B6mL3mL无

终止液12mL6mL无

封板膜2张2张无

说明书1份1份无

自封袋1个1个无

操作步骤

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL；

3.  待测样本孔加待测样本50μL；

4.  随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．牛焦虫病抗体（PIR-Ab）ELISA检测试剂盒不同批号组分不得混用。