供货周期 | 两周 | 规格 | 瓶 |
---|---|---|---|
货号 | P68032 | 应用领域 | 医疗卫生,生物产业,制药/生物制药 |
主要用途 | 仅供科研 |
名称 | pLV3-U6-AQP2(human)-shRNA1-CopGFP-Fluc-hPGK-Puro |
别称 | - |
质粒宿主 | 哺乳细胞,慢病毒 |
质粒用途 | 干扰沉默 |
片段类型 | shRNA |
片段物种 | 人 |
原核抗性 | Amp |
筛选标记 | Puro |
荧光标记 | 绿色,Fluc |
启动子 | U6 |
复制子 | pUC |
感受态 | Stbl3 |
温度 | 37度 |
背景载体 | pLV3-U6-MCS-shRNA-CopGFP-Fluc-hPGK-Puro |
正向引物 | U6-F |
注意事项:转化前请准确查找该质粒相应的抗生素名称、抗生素使用浓度、感受态名称和培养温度。
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl~50μl无菌水或 pH8.0 的 1*TE缓冲液来溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒
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