AIWB-012 亲和生命Co-IP/WB 组织/细胞通用裂解液

产品特点

性能温和 —— 在非变性条件下裂解细胞，不破坏蛋白间相互作用

强效保护 —— 多种蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂维持蛋白原有状态

普适性强 —— 适用于动物、植物、真菌及细菌的细胞或组织样品

兼容性强 —— 兼容多种实验室WB，IP及Co-IP等

适用于动物、植物、真菌及细菌的细胞或组织样品。提取的蛋白样品可用于PAGE，Western  Blot，免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)和免疫共沉淀(Co-IP)等实验。

06 使用方法

06-1 提取细胞蛋白 a. 贴壁细胞： 1. 去除培养液后，用1×PBS轻柔漂洗一遍； 2. 按照6孔板每孔加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液，然后用移液枪吹打数下，使裂解液 和细胞充分接触； 规格 适用于动物、植物、真菌及细菌的细胞或组织样品。提取的蛋白样品可用于PAGE，Western  Blot，免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)和免疫共沉淀(Co-IP)等实验。3. 冰浴或4℃ 静置15 min，使细胞充分裂解。 b. 悬浮细胞： 1. 低速离心收集细胞，用1×PBS重悬并清洗一遍； 2. 再次低速离心收集细胞，去除上清，收集沉淀，通过涡旋或者手指轻弹管底，分散细胞； 3. 按100万细胞加入100-200μL裂解液的比例加入裂解液； 4. 用移液枪吹打数下使裂解液和细胞充分接触，冰浴或4℃静置15 min，直至无明显的细胞沉淀 5. 若样品粘稠，可用注射器反复吹打，降低样品粘稠度后进行下一步实验。 c. 细菌或酵母： 1. 取1 mL菌液或酵母液低速离心，去除上清，用1×PBS重悬并清洗一遍； 2. 再次离心，去除上清，然后通过涡旋或者手指轻弹管底，分散底部的细菌或酵母； 3. 加入100-200 μL裂解液，轻轻涡旋以混匀，冰浴或4℃静置15 min。 注：细菌和酵母可以分别使用溶jun酶和破壁酶(Lyticase)消化，再加入裂解液，裂解效果更佳。 d. 收集蛋白样品： 1. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5 min，取上清； 2. 进行后续的PAGE、WB、IP和Co-IP等实验

06-2 提取组织蛋白 a. 将新鲜组织块迅速置于预冷的生理盐水中，漂洗数次，洗净组织血迹，用滤纸吸干组织表面液 体，然后将组织切成细小的碎片； b.准备多个EP管，称重并做好标记，将组织小块放入EP管中，称重，按照每20mg组织加入 100-200μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不到位，可适当增加裂解液使用量，如果需要较 高浓度的蛋白样品，可适当减少裂解液使用量； c. 用玻璃匀浆器或组织研磨器冰浴匀浆1-2 min，直至充分裂解； d. 10000-14000g离心3-5 min，取上清，即可进行后续PAGE、WB、IP和Co-IP等实验。