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NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)活性测定试剂盒

具体成交价以合同协议为准

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上海牧荣生物科技有限公司 是一家专注于分子生物学、细胞生物学、细菌学、遗传学、免疫学、生物化学、蛋白质学、细胞治疗、临床应用等领域,以销售为主的生物技术公司。销售的产品涉及,细胞株和菌株、胎牛血清、生化试剂、ELISA试剂盒、抗体和抗原、细胞因子、技术服务、实验耗材和消耗品、仪器设备等。客户遍布大学、研究所、医院、卫生防疫、商品检验检疫、制药公司、生物技术公司和食品工业等单位。公司与国内外生物试剂供应商保持着密切的合作关系,有着非常好的货源渠道, 可以在为用户提供前沿和完备的产品和物流服务。

公司的目标成为中国生命科学和生物技术等领域坚强的后盾,为这些领域的发展提供服务。以“质量是企业的生命,诚信是经营的资本”为警醒 ,严把所售出商品的质量关,不做任何有损顾客利益的事情。

公司代理国内外众多生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品,公司坚持“一站式”服务模式,为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合与国内资源,加强网络建设,提高公司内部运作效率,为客户提供方便、快捷的服务。

公司突出创新思维,提高工作效能,减低运作成本,为客户提供优惠的价格。

 

公司的经营理念:发展依靠人、发展适应人,发展为了人、发展培养人

 

公司的价值观:以诚取信、合作双赢

 

公司的目标:让客户满意、让员工满意、让合作伙伴满意

 

原装进口生命科学类产品

供货周期 现货 应用领域 医疗卫生,化工,生物产业,农业,制药

NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)活性测定试剂盒


注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶,在外源物质代谢中具有重要作用,尤其是药物和毒物的代谢。NCR作为P450酶系的重要一员,催化氧化型P450还原再生。

测定原理:

NCR催化NADPH还原氧化型细胞色素C,还原型细胞色素C在550nm处有特征吸收峰;通过测定550nm吸光度的增加速率,来计算NCR活性。

自备仪器和用品:

普通离心机,超速离心机、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂组成和配置:

试剂一:粉剂×2瓶,4℃保存。临用前根据用量每瓶加100mL蒸馏水充分溶解。

试剂二:液体×1瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1管,-20℃保存。临用前配制,加1.04 mL蒸馏水充分溶解,4℃保存。

试剂四:粉剂×1管,4℃保存。临用前配制,加1100 μL蒸馏水充分溶解,4℃保存。

粗酶液提取:

1、除去细胞核和线粒体等:称约0.5g组织,加入4℃预冷的1 mL试剂一,冰上充分研磨,10 000g 4℃离心30min,取上清液,转移到超速离心管中。

2、粗制微粒体:4℃,100 000g,离心60min,弃上清液。

3、除血红蛋白等杂质:向步骤2的沉淀中加1 mL试剂一,盖紧后充分震荡溶解,100 000g离心30min,弃上清液。

4、最终微粒体:向步骤3的沉淀中加试剂二0.5 mL,盖紧后充分震荡溶解,4℃保存待测。

NADPH-细胞色素C还原酶测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到550 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二在37℃水浴中预热30min。

3. 空白管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入10μL蒸馏水、180μL试剂二、10μL试剂三和10μL试剂四,迅速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化,第10s和第130s吸光值。△A空白管=A2-A1。

4. 测定管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入10μL提取液、180μL试剂二、10μL试剂三和10μL试剂四,迅速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化,第10s和第130s吸光值。△A测定管=A4-A3。

注意:空白管只需做一次。

NCR活性计算公式公式:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1)按蛋白浓度计算

活性单位定义:37℃中,每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol还原型细胞色素C为1个酶活单位。

NCR ((nmol/min /mg prot)= (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总÷(Cpr×V样)÷T

= 550×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr

(2)按样本质量计算

活性单位定义:37℃中,每克组织每分钟催化产生1μmol还原型细胞色素C为1个酶活单位。

NCR ((nmol/min/g 鲜重)= (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T

=275×(△A测定管-△A空白管)÷W

ε:还原型细胞色素C摩尔消光系数,19100L/mol/cm=0.0191L/μmol/cm;d:比色皿光径(cm),1cm;V反总:反应体系总体积(L),210μL=2.1×10-4L;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),10μL=0.01mL;V样总:提取液体积,0.5 mL;T:反应时间(min),2min 。

b.使用96孔板测定的计算公式如下

(1)按蛋白浓度计算

活性单位定义:37℃中,每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol还原型细胞色素C为1个酶活单位。

NCR ((nmol/min/mg prot)= (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总÷(Cpr×V样)÷T

= 1100×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr

(2)按样本质量计算

活性单位定义:37℃中,每克组织每分钟催化产生1μmol还原型细胞色素c为1个酶活单位。

NCR ((nmol/min/g 鲜重) = (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T

= 550×(△A测定管-△A空白管)÷W

ε:还原型细胞色素C摩尔消光系数,19100L/mol/cm=0.0191L/μmol/cm;d:96孔板光径(cm),0.5cm;V反总:反应体系总体积(L),210μL=2.1×10-4L;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;V样:加入反应体系中上清液体积(mL),10μL=0.01mL;V样总:提取液体积,0.5mL;T:反应时间(min),2min 。

注意事项:

试剂三、试剂四临用前配制,配好未使用完的4℃可保存两天。


上海牧荣生物科技有限公司

  1. 国内试剂耗材经销代理。

  2. 国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。

  3. 提供加急物流处理,进口货物,最快交期1-2周。

  4. 进出口货物代理服务。

  5. 公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重点合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

  6. 质量保证,所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式”服务模式,为客户全面解决实验、生产、开发需求。公司整合国际与国内资源,加强网络建设,提高公司内部运作效率,为客户提供方便、快捷的服务。

  7. 公司突出创新思维,提高工作效能,减低运作成本,为客户提供优惠的价格。

NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)活性测定试剂盒



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