ABG719-50 EBY100 酵母感受态细胞

基因型

MATα ura3-52 trp1 leu2∆1 his3∆200 pep4::HIS3prb1∆1.6R can1 GAL (pIU211: URA3)

简要说明

EBY100菌株是酿酒酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和ka那霉素的抗生素，来抑制细菌菌的污染和生长。AngYuBio EBY100感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存3个月，pYD1质粒检测转化效率>104cfu/μgDNA。

操作说明

1、取一支无菌的1.5ml EP管，依次加入预冷的目的质粒1-3µg，Carrier DNA 10µl(95-100 度5min 快速冰浴，重复一次)，100µl冰上融化的感受态细胞，PEG/LiAc 500µl，轻轻翻转混匀6-8次； 

2. 30℃水浴30min，每10min轻轻翻转混匀6-8次；

3. 每支加入20µl的二甲基亚砜；（用于提高转化效率,可不做）

4. 42℃水浴15min，每5min轻轻翻转混匀6-8次；

5. 12000rpm瞬时离心弃上清，每支加入1ml的YPDPlus于30℃复苏1h；（用于提高转化效率，可不做）

6. 12000rpm瞬时离心弃上清，用100µl 0.9%NaCl重悬，涂板，30℃培养48-96h。

注意事项

1、感受态细胞最好在冰上融化。

2. PEG溶液在低温环境下会析出，请于常温下溶解后使用。