TP1033 植物根系活力检测液(甲烯蓝比色法)

植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和代谢水平即根系活力直接影响植物地上部的生长和营养状况以及最终产

量，是植物生长的重要生理指标之一。植物根系活力(根系脱氢酶活性)可以采用TTC还原、萘胺氧化和甲烯蓝吸附等方法测定。

根系能氧化萘胺生成红色的萘胺化合物，根系对萘胺的氧化能力与其呼吸强度有密切联系。

植物根系活力检测液(甲烯蓝比色法)检测原理是在弱酸性条件下，以萘胺为底物，萘胺与对氨基苯磺酸、亚硝酸盐

作用生成稳定的红色偶氮化合物，可以根据根系表面着色深浅，通过酶标仪510nm检测溶液中未被氧化的萘胺的量，

以定量测定根系活力。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

操作步骤(仅供参考)：

自备材料：

1、蒸馏水

2、电子天平、研钵或匀浆器、离心管或试管

3、低温离心机、恒温箱或水浴锅、酶标仪、酶标板

操作步骤(仅供参考)：

1、准备样品∶

①植物样品︰取1g植物组织或水果中层果肉，加入2.5ml PAL Lysis Buffer，冰浴情况下充分捣碎研磨或匀浆，4℃ 10000r/min

离心15~20min，留取上清液，-20℃冻存，用于苯丙氨解氨酶的检测。

②血浆、血清和尿液样品︰血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，-20℃冻存，用于苯丙解氨的检测。

③细胞或组织样品∶取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，4℃ 10000r/min离心15~20min，取上清液，

-20℃冻存，用于苯丙酸解氨酶的检测。④高活性样品︰如果样品中含有较高活性的苯丙解氨酶，可以使用蒸馏水或PAL

Lysis Buffer稀释进行恰当的稀释。

2、PAL加样∶

取96孔板，按照下表设置对照孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并

注意避免产生气泡。如果样品中的PAL活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置2平行孔，

求平均值。

加入物（μl）对照孔测定孔

蒸馏水150100

待测样本5050

PAL Assay Buffer-50

3、PAL检测︰

以对照孔为对照(调零)，酶标仪立即测定290nm处测定孔的吸光度(记为   A测定0);40℃准确孵育1h，立即加入10μl PAL终止

液终止反应(备选方案)，以对照孔为对照调零，酶标仪立即测定290nm处测定孔的吸光度(记为A测定1)。

注意︰加入PAL终止液终止反应为非必须步骤，可37℃准确孵育1h后直接以对照孔为对照调零，酶标仪立即测定290nm处测定

孔的吸光度。

注意事项∶

1、待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。

2、获得上清液为PAL酶液，应尽快检测，亦可-20°℃保存。

3、如果没有可测定紫外区的酶标仪和酶标板，也可以使用紫外分光光度计和石英比色皿，但应注意比色杯的最小检测体积。

4、每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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