NanoTemper PR Panta 蛋白稳定性分析仪

蛋白稳定性分析仪

结合微量差示扫描荧光nanoDSF (nano Differential Scanning Fluorimetry）技术、动态光散射DLS (Dynamic Light Scattering)技术、静态光散射SLS(Static Light Scattering)技术以及背反射（Backreflection）技术，实现了在整个热升温过程中，【同时且实时地】检测样品构象、粒径和聚集变化，实现对生物制剂高分辨率的、结构域的稳定性表征，监测整个生物制剂研发流程中的关键环节，加速生物药开发进程。

生物制品的开发过程漫长而复杂，从候选分子到最终变成产品都需要检测一系列重要参数作为支持。从上游筛选、构建或改造候选分子，到制剂优化、可开发性评估，以及下游生产工艺优化，PR Panta 都可以始终如一地为候选分子提供全面的参数稳定性表征和可信赖的结果，精准比较不同团队和不同批次样品的构象与胶体稳定性数据时保持一致性。

产品优势：

【同时且实时】：实现在整个升温过程中实时监测和记录，同时提供构象稳定性、粒径及聚集数据，并在结构域水平上获得全面且完整的稳定性信息；

【超高分辨率】：误差值在±0.008的高分辨率，检测多个热变性时可有效区分具有相似Tm的结构域，弥补由于监测技术瓶颈而忽略掉的关键信息；

【高特异性】：可有效区分生物制剂信号与缓冲液或细胞间质信号；

【数据精准、重复性好】：Tm误差范围仅为±0.1 °C，提供真实的检测结果；

【通量灵活、操作简便】：无论是上游制剂开发还是下游工艺优化，无论浓度高低，一台Panta即可满足整个流程的稳定性检测需求，节约成本和时间。

实体参数：

可以让您在单次运行中测量热稳定性，聚集，粒径大小和分散性 - 无标记检测，仅需使用微量样品。依靠 Prometheus 获得可靠的、高分辨率的蛋白质稳定性数据，检测出不易被发现的稳定性行为， 让您对目标最佳候选分子和条件都更加充满信心。

 • 超高分辨率的生物物理检测方法：通过了解影响蛋白稳定性的温度和化学条件，对蛋白功能进行更深入的剖析，从而全面了解蛋白质的折叠特性和结构域。使用 PR 系列蛋白稳定性分析仪，轻松改善蛋白纯化工作流程，快速排查各种生物制剂功能研究中的问题。

 • 全面检测：快速测定不同缓冲液、盐浓度、pH 和离子对蛋白质热变性的影响。确定不同批次实验之间的相似性。

 • 优化储存和制剂条件：精确测定不同贮藏条件对蛋白质稳定性的影响。确定最佳制剂条件，确保蛋白稳定性。

 • 预测聚集：轻松预测蛋白聚集趋势，更全面地了解影响蛋白质稳定性的各类因素。

1. 技术优势

（1）天然条件下检测：无需添加染料或改变样品缓冲液。可检测粘稠样品。

（2）样品准备：样品直接吸入毛细管，上样极简单。

（3）数据精准：高密度的数据点意味着高质量的数据，其他技术遗漏的细节我们却可以得到。

（4）同步测量：同步得到 T_m、T_onset 和 T_turbidity 等多个实验结果。

（5）样品消耗少：10 μL 样品量 ，浓度 5 μg/mL 即可检测。

（6）检测更多条件：一次测试得到多个参数，使您更快获得结果。

（7）通量选择自由：灵活的样品数量，一次实验可做 1 个、48个或任意数量的样品，也可以选择全自动上样。

2. 技术原理

（1）微量差示扫描荧光技术 (nanoDSF)

PR 系列基于微量差示扫描荧光技术 (nanoDSF) 技术，可在天然条件下检测蛋白热变性和化学变性。蛋白中色AN酸和LUO氨酸的荧光与其所处的环境密切相关。免标记的 nanoDSF 技术可以准确检测蛋白热变性和化学变性过程中内源荧光的变化。因此，通过检测荧光变化，可实现在非标记环境下测定蛋白的热稳定性或化学稳定性。更重要的是，数据质量不会受样品聚集影响。高质量的数据助您做出更好的决定。

PR 系列是通过检测蛋白的内源性荧光来跟踪其折叠状态。荧光信号的比值会随着温度的增加或化学变性剂浓度的增加 而变化，从而测定蛋白稳定性参数 T_m 值。

（2）背反射技术（Backreflection）

NanoTemper 公司研发的背反射光学模块主要用于检测蛋白的聚集现象。 蛋白的聚集检测主要基于颗粒的光散射效应。归功于 PR 系列产品使用的高精度毛细管和自动化的内部参比，聚集检测的重复性和灵敏性均优于传统方式。同时，由双通道 UV (Dual - UV Technologies) 检测模块获得的高密度数据能够同步监测蛋白的去折叠过程。热稳定性和聚集起始温度的同步检测，能非常快速的给您够提供精确、信息全面的蛋白稳定性分析数据。

（3）动态光散射技术（DLS）

用于检测水力学半径，均一性以及自相互作用 K_D 

图 1：激光 (紫色虚线) 被溶液中的粒子所散射，散射光（紫色波浪线）被用于检测粒子的布朗运动。 

图 2 ：仪器采集散射光强度随时间的波动，较小的粒子扩散得更快，导致波动强度比较大的粒子更大。因此， 散射光强度的波动可用于提取扩散系数和计算粒子尺寸。 

图 3：自相关函数描述了一个粒子在一段时间内在同一位置被发现的概率 (用 Tau 表示 )。当较大的粒子经 历较慢的布朗运动时，它们的自相关函数经历较慢的衰减，而较小、较快的粒子的自相关函数衰减得更快。 

图 4：拟合自相关函数来确定扩散系数 D，并代入 Stokes-Einstein 方程。该方程与粒子的大小 (半径) 和扩 散系数有关，由此可以确定溶液中粒子的大小。

（4）静态光散射技术（SLS）

与动态光散射不同，静态光散射检测的是溶液中所有粒子的平均散射光强度 , 计算样品的分子量以及第二维里系数 B₂₂。

3. 简单、灵活的分析软件

Prometheus Panta 配备了 Panta Control，Panta AutoControl 及 Panta Analysis 三个软件，助您轻松完成多参数蛋白稳定性分析。您可通过 Panta Control 软件在一次升温过程中同时且实时检测样品的T_m 、T_onset、T_turbidity、T_size 和 T_scattering，单独运行光散射模块进行自相互作用分析，通过化学变性实验检测样品去折叠的自由能 ΔG 或进 行加速实验。Panta AutoControl 软件可帮您完成 1356 个样品的自动化筛选。Panta Analysis 软件可进行重复样品的统计分析以及数据叠加呈现。您可自定义所需呈现的检测参数，设定模板进行标准化分析并批量导出数据。

4. 典型应用

（1）抗体可开发性评估

（2）可比性研究

（3）多参数高通量制剂筛选

（4）化学变性实验

（5）高浓度样品聚集预测-DLS

（6）高浓度样品聚集预测-SLS

（7）片段化合物库筛选

（8）结合分枝杆菌延伸因子药物筛选

（9）蛋白液 - 液相分离药物开发

（10）核苷酸糖转运蛋白底物调控机制

（11）酶库高通量筛选

（12）高通量膜蛋白去垢剂筛选