亚硝酸还原酶(NiR)测试盒  

微量法100T/48S

注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

硝酸还原酶（NiR）是一类能催化亚硝酸盐还原的酶，广泛存在于微生物及植物体内，是自然界氮循环过程中的关键酶，可以将亚硝酸盐降解为NO或NH3，从而减少环境中亚硝态氮的积累，降低因亚硝酸盐累积而造成的对生物体的毒害作用。

测定原理：

亚硝酸还原酶可将NO₂^—还原为NO，使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO₂^—减少，即540nm处吸光值的变化可反映亚硝酸还原酶的活性。

需自备的仪器和用品：天平、研钵、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、水浴锅、低温离心机。

试剂的组成和配制：

提取液：液体112mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体4mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加5mL蒸馏水溶解。

试剂三：液体5mL×1瓶，4℃保存。（如出现沉淀可以70-80℃加热溶解）

试剂四：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。（如出现沉淀可以70-80℃加热溶解）

试剂五：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。

工作液：临用前根据用量将试剂四和试剂五以1:1的比例混合。

酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2．细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。

亚硝酸还原酶(NiR)测试盒