白介素-6受体（可溶性）ELISA KIT​

白介素-6受体（可溶性）ELISA KIT

白介素-6受体（可溶性）ELISA KIT，专为定量检测生物样本里可溶性白介素 - 6 受体含量设计，在科研领域对免疫及炎症研究意义重大。

1. 检测原理：基于双抗体夹心酶联免疫吸附测定法。酶联板预先包被针对可溶性白介素 - 6 受体的特异性抗体。样本加入后，其中的可溶性白介素 - 6 受体与固相抗体结合。随后加入酶标记的抗可溶性白介素 - 6 受体抗体，形成 “固相抗体 - 可溶性白介素 - 6 受体 - 酶标抗体” 复合物。经洗涤去除未结合物，加入底物溶液（如 TMB），在酶催化下底物显色，颜色深浅与样本中该受体含量成正比。通过酶标仪在 450nm 波长测吸光度，与标准曲线对比得出样本中可溶性白介素 - 6 受体浓度。

2. 试剂盒组成

• 酶联板：有 96 孔或 48 孔规格，预包被抗体，为反应承载物。

• 标准品：通常为冻干品，需用标准品稀释液复溶并稀释成系列浓度梯度，如 0、15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mL，用于绘制标准曲线。

• 样本xi释液：用于稀释浓度过高的待测样本，使样本浓度适配试剂盒检测范围。

• 酶标抗体：即 HRP 标记的抗可溶性白介素 - 6 受体抗体，为浓缩液，需用酶标抗体稀释液按要求稀释。

• 酶标抗体稀释液：专门用于稀释酶标抗体。

• 底物溶液：如 TMB 底物，与酶标抗体中的 HRP 反应产生颜色变化。

• 洗涤液：一般为浓缩液，按比例用蒸馏水或去离子水稀释后，用于洗涤酶联板，去除未结合物质，降低背景干扰。

• 终止液：多为强酸溶液（如硫酸），用于终止底物显色反应，稳定反应液颜色以便读数。

• 封板膜：温育时覆盖酶联板，防止液体蒸发和外界污染。

• 使用说明书：详细介绍使用方法、注意事项、性能指标等。

3. 样本要求

• 血清：采集血液后，室温放置 2 小时或 4℃过夜，1000×g 离心 20 分钟取上清，采血需用无热原、无内毒素一次性器材。

• 血浆：可用 EDTA、肝素等抗凝，样本采集后 30 分钟内，2 - 8℃下 1000×g 离心 15 分钟取上清。

• 细胞培养上清：1000×g 离心 20 分钟，去除细胞碎片和杂质后取上清检测。

• 组织匀浆：用预冷 PBS（0.01M，pH = 7.4）冲洗组织，去除残留血液，剪碎组织后按 1:9（w/v）加 PBS，冰上充分研磨，5000×g 离心 5 - 10 分钟取上清。

• 样本采集后若短期内检测，可 4℃保存；长期保存需 - 20℃或 - 80℃冻存，且避免反复冻融，溶血样本一般不适合检测。

4. 操作流程

• 准备工作：从冰箱取出试剂盒，平衡至室温（约 30 分钟），稀释浓缩洗涤液。

• 加样：设空白孔、标准品孔和样本孔。空白孔加样本xi释液，标准品孔加不同浓度标准品，样本孔加处理好的样本，每孔加样量通常 100μL，轻轻混匀，37℃温育 90 分钟。

• 洗涤：弃去孔内液体，用洗涤液加满各孔，浸泡 1 - 2 分钟后甩干，重复洗涤 5 次，确保洗净未结合物质。

• 加酶标抗体：每孔加 100μL 稀释好的酶标抗体工作液，37℃温育 60 分钟。

• 再次洗涤：重复上述洗涤步骤。

• 显色：每孔加 90μL 底物溶液，轻轻混匀，37℃避光显色 15 - 30 分钟（依实际显色情况判断）。

• 终止反应：每孔加 50μL 终止液，溶液颜色由蓝色变为黄色。

• 读数：加终止液后 15 分钟内，用酶标仪在 450nm 波长测各孔吸光度（OD 值）。

• 计算结果：以标准品浓度为横坐标，OD 值为纵坐标绘制标准曲线。根据样本 OD 值从标准曲线查出对应浓度，若样本稀释过，需乘以相应稀释倍数得实际浓度。

5. 性能指标

• 检测范围：常见为 15.6 - 1000 pg/mL 等区间，满足多种样本检测需求。

• 灵敏度：可低至 7.8 pg/mL 甚至更低，能检测微量的可溶性白介素 - 6 受体。

• 特异性：对该受体高度特异，与其他细胞因子受体等几乎无交叉反应。

• 重复性：板内变异系数一般小于 10%，板间变异系数小于 15%，保障检测结果稳定可靠。