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17羟基孕酮试剂盒主要基于酶联免疫吸附试验（ELISA）原理，通过竞争抑制法或双抗体夹心法对样本中的17羟基孕酮（17-OHP）进行定量测定。
竞争抑制法中，试剂盒将纯化的17-OHP包被在微孔板上作为固相抗原。检测时，样本中的17-OHP与酶标记的17-OHP竞争结合微孔板上的有限抗体结合位点。样本中17-OHP浓度越高，与酶标记17-OHP竞争结合的抗体就越少，最终形成的酶标复合物量越低。经洗涤去除未结合物质后，加入底物TMB显色，酶催化反应使颜色深浅与样本中17-OHP浓度成反比。通过酶标仪测定450nm波长下的吸光度值，结合标准曲线即可计算样本浓度。
双抗体夹心法则采用两株针对17-OHP不同表位的特异性抗体。一株抗体包被微孔板作为捕获抗体，另一株抗体标记HRP作为检测抗体。检测时，样本中的17-OHP与捕获抗体结合后，再与检测抗体形成"抗体-抗原-酶标抗体"复合物。经洗涤去除游离成分，加入底物显色后，颜色深浅与样本中17-OHP浓度成正比。通过标准曲线换算，可实现样本浓度的定量分析。
两种方法均需严格控制实验条件，包括样本采集时间、储存温度及试剂平衡时间。操作过程中需避免反复冻融样本，防止溶血或高脂血症样本干扰检测结果。试剂盒的灵敏度、特异性及线性范围需通过方法学验证，确保不同批次试剂的检测一致性。
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