动物组织匀浆制备实验

1、取组织块(0.2g 1g)少可到2~5mg,在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称
重，放入5或10m1的小烧杯内
2、用移液管量取预冷的匀浆介质或者用0. 86%冷生理盐水，匀浆1 )质或生理盐水的体积总量应该是组织块重量的9倍,用移液管或移液器取总量的2/3的匀浆^质或生理盐水于烧杯中,用眼科小剪尽快剪碎组织块(天然时操作要在冰水浴中进行,将盛有组织的小烧杯放入冰水中)。

3、匀浆的方式有多种:手工匀浆、机器匀浆、超声匀浆、反复冻融。
手工匀浆:将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中,再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆,左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次(6~8分钟) ,充分研碎，使组织匀浆化。
机器匀浆:用组织捣碎机10000~ 15000r /min上下研磨制成10%组织匀浆，也可用内切式组织匀浆
机制备(匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3~5次,在冰水中进行) ,皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。
超声粉碎:用超声粉碎机进行粉碎，可用Soniprep150型超声 波发生器以振幅14微米超声处理30秒
使细胞破碎,也可用国产超声波发生仪，用40安培，5秒/次，间隙10秒反复3~5次。反复冻融:培养或者分离的细胞可以用以上的方法匀浆，也可以反复冻溶3次左右(即让细胞加适量的低渗液或者双蒸水放低温冰箱中结冰，溶解，再结冰，再溶解，反复3次左右) ,但有部分酶活力会受影响。取少量组织匀浆做涂片(直接涂片、染色均可)，显微镜下观察细胞是否磨破，若没有破则可以延长匀浆时间或增加冻融次数。
4、将制备好的10%匀浆用普通离心机或低温低速离心机3000r /min左右离心10~15分钟，若检测
ATP酶，则只需要1000转/分，离心5分钟，将离心好的匀浆留下，上清弃下面沉淀。