IMDM 培养基

‌无菌操作‌：细胞培养需在无菌环境下进行，使用前需对超净工作台进行紫外线照射灭菌，定期清洁培养箱。实验人员需更换工作服、鞋套，戴口罩、手套。

‌器材灭菌‌：玻璃器皿、金属器械等可采用高压蒸汽灭菌，塑料制品则多选择环氧乙烷灭菌或购买已灭菌产品。

‌试剂选择‌：所用培养液、血清、缓冲液等试剂应无菌、无污染，使用前需进行无菌检测。不同细胞对培养液成分要求有差异，应按细胞类型选择合适培养液。

‌培养条件‌：多数哺乳动物细胞适宜培养温度为37℃，偏差应控制在±0.5℃。培养箱应保持良好密封性，定期检查气体浓度与流量，细胞培养通常需5%CO2以维持培养液pH值稳定。培养箱内湿度应保持在95%左右。

‌日常观察‌：每天在显微镜下观察细胞形态、生长状态与培养液颜色变化。

‌定期检测‌：定期对细胞进行支原体、细菌、真菌等污染检测。

IMDM 培养基

Iscove’s Modified Dulbecco Medium (IMDM)，Guilber 和Iscove将Dulbecco’Medium 改良为 Iscove’s Medium，用于培养红细胞和巨噬细胞前体。此种培养液含有硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和HEPES。并用硝酸钾取代了硝酸铁。IMDM还能够促进小鼠B淋巴细胞，LPS刺激的B细胞，骨髓造血细胞，T细胞和淋巴瘤细胞的生长。IMDM为营养非常丰富的培养液，因此可以用于高密度细胞的快速增殖培养。

 运输和保存

运输：放置于含有生物冰袋的保温箱中低温运输

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2个月；׏

注意仅限科研用。

培养体系中的一些组分是对人体健康有害的物质，请不要用暴露的皮肤接触培养体系的液体和有培养体系的液体残留的容器内部；这部分有害物质的浓度和危害性都较低，如有接触，立即用自来水冲洗即可。

复苏

1) 将恒温水浴锅中的水预热到 37℃；

2) 准备一支 15ml 离心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培养基，放入 37℃水浴锅中预热；

3) 戴上护目镜，厚毛线手套后，从液氮罐中取出要复苏的细胞，尽快转入 37℃恒温水浴锅中

复温晃动冻存管以提高复温速率；

4) 将融化了的冻存管中的细胞吸入事先准备的离心管中，混匀后，1000rpm 离心 5min；

5) 准备一个 T-25 培养瓶，写上细胞名称、日期，再加入 4ml 培养基；

6) 离心完成后弃去上清，用 1ml 培养基重悬细胞后，转入 T-25 细胞培养中，混匀后转入

CO2 培养箱中培养静置。

传代 （细胞传代建议一传二）

1) 当细胞汇合度达到 85%以上时，可进行传代。

2) 在生物安全柜内，打开培养瓶瓶口，收集瓶内的培养基；

3) 向培养瓶内加入 3ml 无菌的 1×PBS 后，水平放置培养瓶，使PBS 能够浸润到培养瓶底面上所有的面积，吸弃 PBS；

4) 向瓶内加入消化液 1ml，浸润底面后放入 37℃ CO2培养箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置显微镜下观察细胞是否变圆飘起，若全部消化下来则直接向培养瓶内加入2ml 含 10%FBS 的培养基中，将悬液吸入 15ml 离心管；

① 准备一个无菌的 15ml 离心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培养基；

② 将消化下来的细胞吸入①中的离心管内中和（避免吹打③）；向之前消化的培养瓶中加入 1ml 继续消化 2min 左右，轻拍培养瓶，95%左右细胞脱。

6) 1000rpm 离心 5min；

7) 准备两个新的 T-25 培养瓶，各加入 4ml培养基。

8) 离心完成后，弃上清，用 2ml 培养基重悬离心细胞，将重悬后的细胞转入 2 个 T-25 培养瓶，每个培养瓶各 1ml；

9) 水平放置培养瓶，震荡混匀后，将培养瓶置于 37℃，5%CO2培养箱中静置培养。 

冻存 （细胞冻存建议每瓶 T25 冻一支）

1）~6）参照传代步骤

7）离心完成后，弃上清，用 1mL 冻存液重悬细胞沉淀，然后转入 1.8ml 冻存管中；

8）将冻存管转入填充满异丙醇的程序降温盒中，之后转入-80℃冰箱中过夜降温；

9）第二天，取出降温完成的序降温盒中的冻存管，尽快转入液氮罐中保存。

小鼠可溶性肌球蛋白重链1(sMHC-1)Elisa 试剂盒 96T/48T

Rat macrophage inflammatory protein 3 alpha (MIP-3 alpha /CCL20) ELISA Kit 大鼠巨噬细胞性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)试剂盒

HumanFibrinogenlikepeptide2,fgl2ELISAKit 人纤维介素蛋白(fgl2)试剂盒 96T/48T 进口分装

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植物P型氢ATP酶(H+-ATPase)活性比色法定量试剂盒20次

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大鼠载脂蛋白A2(APOA2)试剂盒 ，英文名： APOA2 ELISA Kit

Mouse thioredoxin (x) ELISA Kit 小鼠硫氧化还原蛋白(x)试剂盒

MouseMacrophageInflammatoryProtein1α,MIP-1αELISAkit 小鼠巨噬细胞性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanFactorVIII-relatedAigen,FVIIIAgELISAKit人第八因子相关抗原

细胞/组织基因组/线粒体DNA同步萃取试剂盒10/20次

ELISAKitMMP-鼠基质金属蛋白酶10

兔白介素-18(rabbit IL-18)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

兔免疫球蛋白G(rabbit IgG)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

兔免疫球蛋白M(rabbit IgM)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

兔免疫球蛋白E(rabbit IgE)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

磷酸化调节元件结合蛋白2抗体

血清学定义结肠癌抗原1抗体

ACE2重组小鼠 ACE2 / Angiotensin-Converting Enzyme 2 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

Ah Receptor(Aryl Hydrocarbon Receptor 0.5mgAh Receptor(Aryl Hydrocarbon Receptor) 芳香烃受体抗原

IZUMO4重组人 IZUMO4 / C19orf36 蛋白 (Fc 标签) Protein

F7 Protein Human 重组人 Coagulation Factor VII /属

IMDM 培养基钙非依赖性0脂酶A2(iPLA2)重组蛋白 Recombinant Phospholipase A2, Calcium Independent (iPLA2)

DAPK3 Protein Human 重组人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 标签)

PREP重组小鼠 Prolyl endopeptidase / PREP 蛋白 Protein

CXCL13 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CXCL13 / BCA-1 / BLC 蛋白

MAP1LC3B重组人 LC3B / MAP1LC3B 蛋白 Protein