BY-1379 LLC-MK2恒河猴肾细胞系
- 公司名称 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型号 BY-1379
- 产地
- 厂商性质 生产厂家
- 更新时间 2025/7/30 10:58:10
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| 供货周期 | 现货 |
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来源与克隆背景：该细胞系源自 20 世纪 50 年代分离的恒河猴肾原代细胞，通过有限稀释法获得单克隆株（“LLC” 代表原始分离实验室代号）。筛选过程以副黏病毒敏感性为核心指标，未引入外源基因，全基因组测序显示其染色体数目为 42（恒河猴正常核型），与原代肾上皮细胞遗传相似度＞96%，核型稳定性在传代 100 次内畸变率＜3%，群体均一性优于早期混合株（流式检测细胞周期同步率偏差＜6%）。
形态与增殖：体外培养呈典型上皮样形态，贴壁生长时呈多边形，胞质丰富，细胞排列紧密呈铺路石状；悬浮培养易脱落死亡，故以贴壁培养为主。37℃、5% CO₂条件下，增殖周期约 32-36 小时，适应含 10% 胎牛血清的 MEM 培养基，传代 80 次以上生长速率衰减＜12%，冻存复苏后存活率超 85%，无血清驯化后细胞密度可达 3×10⁵个 /cm²。
功能特征：核心优势在于副黏病毒受体高表达与复制支持能力：麻疹病毒受体 CD46 表达量较普通猴肾细胞高 4 倍（免疫荧光检测），腮腺炎病毒受体 SLAM（CD150）阳性率＞95%（流式检测）。感染麻疹病毒后 72 小时，病毒滴度可达 10⁷-10⁸ TCID₅₀/mL，较 Vero 细胞高 1-2 个数量级；感染腮腺炎病毒后 60 小时，细胞病变（CPE）率达 90%，表现为多核巨细胞形成，显著特征性优于其他细胞系。
副黏病毒分离与鉴定
副黏病毒疫苗研发与生产
抗病du药物筛选与评价
贴壁培养操作：
复苏：冻存管 37℃水浴 1 分钟解冻，转移至含 10mL 预热培养基（MEM+10% 胎牛血清）的离心管，1000rpm 离心 5 分钟，重悬后接种至 T75 瓶，37℃、5% CO₂培养，24 小时贴壁率超 90%。
换液：接种 48 小时后首ci换液，去除代谢废物，此后每 3 天换液一次，维持细胞密度在 2×10⁴-7×10⁴个 /cm²（密度过高会降低副黏病毒敏感性）。
传代：融合度达 80% 时，弃培养基，PBS 清洗 2 次，加 2mL 细胞解离液，37℃孵育 2-3 分钟，镜检细胞脱落后加 8mL 培养基终止，按 1:4 比例传代，避免过度融合导致受体表达下调。
病毒培养流程：
接种准备：将细胞以 1.2×10⁵个 / 孔接种 24 孔板，培养 24 小时至融合度 70%-80%，接种前用无血清培养基洗涤 2 次。
病毒感染：加入 100μL 系列稀释的副黏病毒液（如麻疹病毒悬液），37℃吸附 1.5 小时，期间每 20 分钟轻摇一次，吸弃病毒液后加含 2% 血清的维持液。
观察与收获：麻疹病毒感染后 60-72 小时观察 CPE，待 80% 细胞出现多核巨细胞时收获上清，-80℃冻存，通过 TCID₅₀法或 RT-PCR 测定病毒滴度。
冻存流程：取对数生长期细胞，1000rpm 离心 5 分钟，冻存液（70% MEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重悬至 6×10⁶个 /mL，分装冻存管，程序降温盒 - 80℃过夜后移至液氮，保存期超 5 年，复苏后传代 2 次再用于病毒实验（确保受体表达稳定）。
优势：对副黏病毒（尤其麻疹、腮腺炎病毒）敏感性ji高（滴度较普通猴肾细胞高 1-2 个数量级）；遗传背景稳定，实验重复性好（CV＜7%）；符合 GMP 标准，无内源性病毒污染；病毒 CPE 特征典型，易于观察鉴定；可适应无血清培养，便于工业化生产。
局限性：对肠道病毒、冠状病毒敏感性较低；贴壁依赖性强，悬浮培养难度大；长期传代（＞100 次）可能出现 CD46 受体表达下调（约 15%）；缺乏干扰素合成能力，可能影响药物体内外活性相关性。
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