BY-1338 CHO-HRH1中国仓鼠卵巢细胞系

来源与构建：该细胞系以 CHO-K1 细胞为亲本，通过慢病毒载体介导将人 HRH1 基因导入细胞基因组，经嘌呤霉素抗性筛选及单克隆纯化获得稳定株，“HRH1” 明确标识其表达的靶受体，与普通 CHO 细胞形成功能区分。构建过程中采用 CMV 启动子驱动表达，结合信号肽优化序列，使 90% 以上的 HRH1 定位于细胞膜，确保受体与配体的高效结合。

形态与增殖：体外培养呈典型上皮样形态，贴壁生长，细胞呈多边形，排列规则，边界清晰，核质比正常，形态与亲本 CHO-K1 细胞一致。在 37℃、5% CO₂条件下，增殖稳定，传代周期约 24-30 小时，可适应含 10% 胎牛血清的 F12K 培养基，传代 60 次以上仍能维持 HRH1 高表达（表达量为亲本细胞的 25-35 倍），受体活性无明显衰减，显著优于瞬时转染系统。

表达特征：HRH1 为 G 蛋白偶联受体（GPCR），膜表达量达（1.5-2.0）×10⁵分子 / 细胞（流式细胞术检测），对组胺的亲和力高（解离常数 Kd≈2×10⁻⁹ M）。激活后可快速启动下游信号通路：通过 Gq 蛋白介导磷脂酶 C（PLC）激活，使胞内 IP3 水平升高，触发钙离子释放（组胺刺激后胞内钙浓度峰值提升 3-5 倍），同时激活 MAPK/ERK 通路，功能活性接近人源组织中的天然受体。

优势：HRH1 表达稳定，长期传代后功能活性波动＜10%，实验重复性优于原代肥大细胞；遗传背景清晰，与 CHO-K1 细胞同源性高，便于通过亲本对照排除非特异性效应；受体信号通路完整，可模拟体内组胺反应的级联过程，功能更接近生理状态；培养条件简单，兼容贴壁与悬浮培养，适合高通量药物筛选。

局限性：作为卵巢来源细胞，缺乏肥大细胞、内皮细胞等 HRH1 主要表达细胞的微环境，部分组织特异性调控机制（如细胞因子对受体的调节）无法wan全模拟；仓鼠与人类的 G 蛋白亚型存在细微差异，可能导致部分信号传导效率与人体存在偏差，需结合人源细胞验证；高表达受体可能导致配体敏感性过高，实验需严格控制组胺浓度。

培养条件：常规使用含 10% 胎牛血清的 F12K 培养基，添加 2μg/mL 嘌呤霉素维持抗性筛选，37℃、5% CO₂培养箱中生长良好。传代时控制融合度在 70%-80%，采用温和方法分离细胞，避免机械损伤影响受体膜定位。进行功能实验前，建议用无血清培养基饥饿处理 16-24 小时，减少血清成分对 GPCR 信号的干扰。

质控与安全：定期通过流式细胞术检测 HRH1 膜表达量，Western blot 验证蛋白完整性；STR 鉴定确保细胞纯度，支原体检测需为阴性。冻存使用含 10% DMSO 的wan全培养基，液氮保存可维持活性 5 年以上，复苏后传代 2 次待状态稳定后再用于实验，保证结果可靠性。