RWPE-2 (前列腺正常细胞)

产品属性：

组织来：前列腺

生长特性：贴壁细胞

细胞形态：上皮细胞样

背景描述：RWPE-2细胞是由Webber·M·M于1996年建株

生物安全等级：2 [Cells contain Human Papilloma viral (HPV) sequences]

生长培养基：K-SFM＋0.05mg/mL BPE＋5ng/mL EGF＋1% P/S

推荐传代比例：1：3-1：4

推荐换液频率：2~3次/周

冻存条件：

冻存液：55% 基础培养基+40S+5%DMSO

温度：液氮

培养条件：

气相：空气，95%；CO2，5%

温度：37℃

致瘤性：Yes, in nude mice. Yes, in soft agar.

受体表达情况：androgen receptor, expressed (upregulated upon exposure to androgen)

抗原表达情况：kallikrein 3, KLK3 (prostate specific antigen, PSA); Homo sapiens, expressed (upon exposure to androgen)

基因表达情况：cytokeratin 18, cytokeratin 8

保藏机构：ATCC; CRL-11610

冷冻保存细胞之方法：

冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃，30~60分钟→ （-20℃，30分钟） → -80℃，16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase长期储存。

冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

培养操作：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻 存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

实验报告：

产品仅用于科研：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4mL酶消化液（0.1%胰和0.1%I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养。

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

RNA 级 CTAB ( 十六烷基基化铵 )100g  脂蛋白纯化试剂盒50次

RNA 级 DEPC ( 焦碳酸 )10mL  脂蛋白 PAGE 染液1套

RNA 级 DTT ( 二硫代苏糖醇 )10g  支气管上皮细胞生长因子5mL

RNA 级 EDTA·2Na ( 四乙酸二 )100g  支气道上皮细胞生长因子5mL

RNA 级 Guanidium HCl ( 盐酸胍 )100g  真细菌种属鉴定 PCR Mix 2100次

FITC标记的腺苷酸环化酶5抗体

FITC标记的腺苷酸环化酶4抗体

FITC标记的腺苷酸环化酶3抗体

FITC标记的腺苷酸环化酶10抗体

FITC标记的芳香胺N-乙酰化转移酶抗体

RWPE-2 (前列腺正常细胞)大鼠低密度脂蛋白受体(LDLR)elisa检测试剂盒

大鼠低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)elisa检测试剂盒

大鼠低密度脂蛋白受体相关蛋白8(LRP8)elisa检测试剂盒

大鼠低氧诱导因子1α(HIF-1α)elisa分析检测试剂盒

大鼠低氧诱导因子1α(HIF1α)elisa检测试剂盒