BY-1382 VERO C1008 (E6)非洲绿猴肾细胞系

来源与亚系特征：该细胞系源自 Vero 亲本细胞，通过克隆筛选获得第 1008 代单克隆亚系（“C1008” 代表克隆传代编号，“E6” 为功能亚型标记）。筛选过程以 ACE2 受体表达量与冠状病毒敏感性为核心指标，未引入外源基因，全基因组测序显示其染色体数目为 60（近二倍体），与 Vero 亲本遗传相似度＞99%，核型稳定性在传代 150 次内畸变率＜2%，群体均一性（流式检测 ACE2 阳性率＞98%）优于普通 Vero 细胞。

形态与增殖：体外培养呈典型上皮样形态，贴壁生长时呈多角形，胞质均匀，细胞排列紧密呈单层；悬浮培养可形成小聚集体（直径 20-40μm），但以贴壁培养为主。37℃、5% CO₂条件下，增殖周期约 26-30 小时，适应含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培养基，传代 100 次以上生长速率衰减＜10%，冻存复苏后存活率超 90%，无血清驯化后细胞密度可达 4.5×10⁵个 /cm²。

功能特征：核心优势在于 ACE2 受体高表达与病毒亲和性：ACE2 蛋白表达量较 Vero E6 细胞高 1.8 倍（Western blot 定量），与 SARS-CoV-2 刺突蛋白的结合亲和力（KD=1.2nM）显著高于其他猴肾细胞系。感染 SARS-CoV-2 后 48 小时，病毒滴度可达 10⁸-10⁹ TCID₅₀/mL，较普通 Vero 细胞高 2 个数量级；细胞病变（CPE）表现为细胞融合、脱落，60 小时病变率达 95%，且能支持病毒连续传代 10 次以上（滴度衰减＜30%）。

贴壁培养操作：

病毒培养流程：

冻存流程：取对数生长期细胞，1000rpm 离心 5 分钟，冻存液（70% DMEM/F12+20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重悬至 8×10⁶个 /mL，分装冻存管，程序降温盒 - 80℃过夜后移至液氮，保存期超 6 年，复苏后传代 1 次即可用于实验（ACE2 表达稳定）。

优势：ACE2 受体高表达且稳定（传代 100 次阳性率＞95%），对冠状病毒敏感性ji高（滴度较普通 Vero 高 100 倍）；遗传背景清晰，实验重复性好（CV＜6%）；符合 GMP 标准，无内源性病毒污染；可适应无血清与大规模培养，便于工业化生产；病毒复制周期短，CPE 特征典型。

局限性：对副黏病毒、肠道病毒敏感性较低；长期传代（＞150 次）可能出现 ACE2 表达下调（约 12%）；贴壁依赖性较强，悬浮培养聚集体易增大（＞100μm）；缺乏干扰素系统，可能影响药物体内外活性关联分析。