BY-1403 MM-K3猕猴肾细胞系

病毒受体表达：细胞膜表面高表达多种病毒受体，如猴免疫缺陷病毒（SIV）的受体 CD4 与共受体 CCR5，人巨细胞病毒（HCMV）的受体 PDGFRα，表达量均显著高于常用的非洲绿猴肾细胞（如 Vero），为多种病毒感染提供分子基础。

病毒敏感性：对乙型脑炎病毒、脊髓灰质炎病毒、轮状病毒等具有广谱敏感性，感染效率达 85%-95%，病毒滴度可达 10⁶-10⁷ TCID₅₀/mL；尤其对灵长类特异性病毒（如 SIV、猴痘病毒）的支持能力突出，滴度较其他猴源细胞高 1-2 个数量级，是研究人畜共患病病毒的理想模型。

代谢特性：具有活跃的葡萄糖转运与氨基酸代谢能力，乳酸脱氢酶活性较低（＜200U/L），适合长时间病毒培养，可延长病毒复制平台期至 72-96 小时。

临床样本检测：可用于从疑似感染样本中分离病毒，如乙型脑炎患者脑脊液样本接种后，48 小时即可观察到典型细胞病变（胞质内颗粒增多、细胞融合），分离效率达 90%，较传统细胞系缩短 12-24 小时，为疫情快速诊断提供技术支持。

病毒分型研究：通过观察不同病毒株在 MM-K3 细胞中的增殖差异，可区分病毒亚型。例如，脊髓灰质炎病毒 Ⅰ 型在该细胞中滴度比 Ⅱ 型高 10 倍，且蚀斑形态更大，为病毒分型提供直观依据。

减毒疫苗株筛选：因对病毒的敏感性与复制支持能力均衡，可用于筛选安全有效的减毒疫苗株。例如，在 MM-K3 细胞中连续传代乙型脑炎病毒，获得的减毒株在猴体实验中神经毒力降低 90%，且保留良好的免疫原性（中和抗体效价达 1:512），为疫苗开发提供候选株。

灭活疫苗生产工艺优化：在微载体培养系统中，MM-K3 细胞密度可达 5×10⁵ cells/cm²，轮状病毒滴度稳定在 10⁷ TCID₅₀/mL，单批次疫苗产量较转瓶培养提升 8 倍，且疫苗抗原纯度更高（杂蛋白含量＜0.1%），符合兽用疫苗生产标准。

宿主适应性突变分析：利用 MM-K3 细胞模拟猕猴宿主环境，研究病毒从动物向人传播的分子机制。例如，通过 SIV 在该细胞与人类 T 细胞中的传代实验，鉴定出 env 基因的 3 个氨基酸突变（V3 环区域），这些突变使病毒获得识别人类 CCR5 的能力，揭示了跨物种传播的关键突变事件。

抗病毒天然免疫研究：该细胞系保留完整的固有免疫通路，可用于研究宿主抗病毒天然免疫应答。例如，敲除 MM-K3 细胞的 TLR7 基因后，寨卡病毒复制效率提升 3 倍，证实 TLR7 介导的 Ⅰ 型干扰素应答在抗病毒中的关键作用，为开发免疫调节药物提供靶点。

培养基：MEM 培养基添加 10% 胎牛血清、1% 谷an酰胺，pH 维持在 7.2-7.4，可加入适量抗生素预防污染（青mei素 - 链mei素终浓度 100U/mL）。

传代流程：当细胞融合度达 70%-80% 时，弃去旧培养基，PBS 洗涤 2 次，加入 0.25% yi酶溶液，37℃孵育 4-5 分钟至细胞脱落，加入含血清的培养基终止消化，按 1:4 比例接种至新培养瓶，避免消化过度影响细胞活性。

冻存保护：取对数生长期细胞，用含 10% DMSO 的wan全培养基重悬至密度 8×10⁵个 /mL，分装后经程序降温盒 - 80℃过夜，转移至液氮长期保存，复苏时 37℃水浴快速解冻，离心去除 DMSO 后接种，传代 2 次待细胞状态稳定后使用。

病毒接种：细胞以 1×10⁵个 / 孔接种 24 孔板，培养 24 小时至融合度 60%，用无血清培养基稀释病毒（MOI=0.1），37℃吸附 1.5 小时，换含 2% 血清的维持液，每日观察细胞病变，72 小时后通过 TCID₅₀法测定病毒滴度。

病毒鉴定：通过间接免疫荧光检测病毒抗原（如乙型脑炎病毒 E 蛋白），或提取病毒 RNA 进行 RT-PCR 鉴定，确保分离病毒的特异性。

优势：

局限性：