BY-1383 FRhK4恒河猴胚肾细胞系
- 公司名称 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型号 BY-1383
- 产地
- 厂商性质 生产厂家
- 更新时间 2025/7/30 11:20:24
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来源与分化特征:该细胞系源自 20 世纪 60 年代恒河猴胚胎肾组织,经原代培养自然永生化获得(“FRhK” 代表恒河猴胚肾,“4” 为克隆编号)。未引入外源转化基因,全基因组测序显示染色体数目为 42(恒河猴正常核型),与原代胚肾细胞遗传相似度>97%,核型稳定性在传代 100 次内畸变率<3%,胚胎期标志物 WT1 表达阳性率达 85%(免疫组化检测)。
形态与增殖:体外培养呈上皮样,贴壁生长为多边形,胞质丰富,排列疏松;悬浮培养可短期存活(72 小时内),以贴壁培养为主。37℃、5% CO₂条件下,增殖周期 24-28 小时,较成年猴肾细胞短 15%-20%,适应含 10% 胎牛血清的 MEM 培养基,传代 80 次以上生长速率衰减<12%,冻存复苏存活率超 88%,无血清驯化后细胞密度可达 5×10⁵个 /cm²。
功能特征:核心优势是病毒受体广谱表达:脊髓灰质炎病毒受体(PVR)与登革病毒受体(DC-SIGN)共表达阳性率>90%(流式检测)。对脊髓灰质炎病毒 Ⅰ 型感染效率达 95%,48 小时病毒滴度 10⁷-10⁸ PFU/mL;感染登革病毒 2 型 72 小时后,细胞圆缩、网格状脱落(典型 CPE),病毒滴度 10⁶ TCID₅₀/mL,显著高于 Vero 细胞(高 1-2 个数量级)。
病毒分离鉴定
疫苗研发生产
药物筛选研究
贴壁培养:
复苏:37℃水浴解冻,转移至含 10mL 预热 MEM(10% 胎牛血清)离心管,1000rpm 离心 5 分钟,接种 T75 瓶,24 小时贴壁率超 90%。
换液:48 小时首ci换液,此后每 2 天一次,维持密度 2×10⁴-8×10⁴个 /cm²(过高降低病毒敏感性)。
传代:融合度 75% 时,PBS 清洗后加 2mL 解离液,37℃孵育 1.5 分钟,终止后按 1:6 传代,避免过度融合丢失胚胎特性。
病毒培养:
接种:1×10⁵个 / 孔接种 24 孔板,24 小时至融合度 60%-70%,无血清培养基洗涤 2 次。
感染:加 100μL 稀释病毒液,37℃吸附 1 小时(每 15 分钟轻摇),换含 2% 血清维持液。
收获:脊髓灰质炎病毒 48 小时、登革病毒 72 小时观察 CPE,80% 病变时收获上清,-80℃冻存,通过空斑法或 RT-PCR 测滴度。
冻存:对数期细胞离心后,用 70% MEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO 重悬至 6×10⁶个 /mL,程序降温后液氮保存,有效期超 5 年,复苏传代 2 次后用于实验。
优势:对脊髓灰质炎、登革病毒敏感性高(滴度超普通猴肾细胞 1-2 个数量级);胚胎细胞特性支持高效复制;遗传稳定(CV<7%);符合 WHO 标准,安全性经长期验证;可支持多类病毒复制,适用于广谱研究。
局限性:对冠状病毒等敏感性低;传代>100 次胚胎标志物可能下调(约 15%);贴壁依赖强,悬浮培养难度高于 CHO 细胞;部分批次可能含内源性逆转录病毒(需 PCR 筛选)。
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