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BY-1383 FRhK4恒河猴胚肾细胞系

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FRhK4恒河猴胚肾细胞系
FRhK4恒河猴胚肾细胞系,FRhK4 细胞系是源自恒河猴胚胎肾脏组织的上皮细胞模型,因对脊髓灰质炎病毒、登革病毒等 RNA 病毒具有高度敏感性,且能支持病毒高效复制,成为肠道病毒与虫媒病毒研究、疫苗生产及药物筛选的重要工具。其保留胚胎肾细胞的高增殖活性与受体多样性,为多类病毒体外研究提供了天然适配的实验环境。
一、细胞来源与基本特性
  • 来源与分化特征:该细胞系源自 20 世纪 60 年代恒河猴胚胎肾组织,经原代培养自然永生化获得(“FRhK” 代表恒河猴胚肾,“4” 为克隆编号)。未引入外源转化基因,全基因组测序显示染色体数目为 42(恒河猴正常核型),与原代胚肾细胞遗传相似度>97%,核型稳定性在传代 100 次内畸变率<3%,胚胎期标志物 WT1 表达阳性率达 85%(免疫组化检测)。

  • 形态与增殖:体外培养呈上皮样,贴壁生长为多边形,胞质丰富,排列疏松;悬浮培养可短期存活(72 小时内),以贴壁培养为主。37℃、5% CO₂条件下,增殖周期 24-28 小时,较成年猴肾细胞短 15%-20%,适应含 10% 胎牛血清的 MEM 培养基,传代 80 次以上生长速率衰减<12%,冻存复苏存活率超 88%,无血清驯化后细胞密度可达 5×10⁵个 /cm²。

  • 功能特征:核心优势是病毒受体广谱表达:脊髓灰质炎病毒受体(PVR)与登革病毒受体(DC-SIGN)共表达阳性率>90%(流式检测)。对脊髓灰质炎病毒 Ⅰ 型感染效率达 95%,48 小时病毒滴度 10⁷-10⁸ PFU/mL;感染登革病毒 2 型 72 小时后,细胞圆缩、网格状脱落(典型 CPE),病毒滴度 10⁶ TCID₅₀/mL,显著高于 Vero 细胞(高 1-2 个数量级)。

二、核心应用领域
  1. 病毒分离鉴定

作为 WHO 推荐的脊髓灰质炎病毒分离 “国际标准模型”,粪便样本接种后分离效率达 98%,较 RD 细胞缩短 12 小时,可通过 CPE 形态区分血清型(Ⅰ 型病变更迅速)。对登革病毒 4 种血清型检出率均>85%,能检测临床样本中低至 5 PFU 的病毒载量,是东南亚登革热监测的shou选细胞模型。
  1. 疫苗研发生产

因胚胎细胞低致瘤性与高安全性,广泛用于脊髓灰质炎减毒活疫苗生产。微载体培养中,病毒滴度达 6×10⁷ PFU/mL,1000L 反应器单批可产 500 万剂口服疫苗,批间差异<8%,优于传统工艺。无血清驯化株降低外源污染风险,疫苗中宿主细胞 DNA 残留<10pg / 剂,符合 WHO 标准。调控 35℃培养与 2% 血清浓度,可提前 8 小时收获病毒,提升生产效率。
  1. 药物筛选研究

为多类病du药物研发提供高效平台。抗脊髓灰质炎病du药物筛选中,空斑减数实验测定普来可那立 EC₅₀=0.6μM,与动物实验相关性 0.89。登革病du药物测试中,区分 NS3 蛋白酶抑制剂与包膜蛋白抑制剂作用差异,灵敏度较 C6/36 细胞高 30%。96 孔板高通量体系日均检测 400 种化合物,适用于广谱抗病du药物筛选。
三、培养方法
  • 贴壁培养

  1. 复苏:37℃水浴解冻,转移至含 10mL 预热 MEM(10% 胎牛血清)离心管,1000rpm 离心 5 分钟,接种 T75 瓶,24 小时贴壁率超 90%。

  1. 换液:48 小时首ci换液,此后每 2 天一次,维持密度 2×10⁴-8×10⁴个 /cm²(过高降低病毒敏感性)。

  1. 传代:融合度 75% 时,PBS 清洗后加 2mL 解离液,37℃孵育 1.5 分钟,终止后按 1:6 传代,避免过度融合丢失胚胎特性。

  • 病毒培养

  1. 接种:1×10⁵个 / 孔接种 24 孔板,24 小时至融合度 60%-70%,无血清培养基洗涤 2 次。

  1. 感染:加 100μL 稀释病毒液,37℃吸附 1 小时(每 15 分钟轻摇),换含 2% 血清维持液。

  1. 收获:脊髓灰质炎病毒 48 小时、登革病毒 72 小时观察 CPE,80% 病变时收获上清,-80℃冻存,通过空斑法或 RT-PCR 测滴度。

  • 冻存:对数期细胞离心后,用 70% MEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO 重悬至 6×10⁶个 /mL,程序降温后液氮保存,有效期超 5 年,复苏传代 2 次后用于实验。

四、优势与局限性
  • 优势:对脊髓灰质炎、登革病毒敏感性高(滴度超普通猴肾细胞 1-2 个数量级);胚胎细胞特性支持高效复制;遗传稳定(CV<7%);符合 WHO 标准,安全性经长期验证;可支持多类病毒复制,适用于广谱研究。

  • 局限性:对冠状病毒等敏感性低;传代>100 次胚胎标志物可能下调(约 15%);贴壁依赖强,悬浮培养难度高于 CHO 细胞;部分批次可能含内源性逆转录病毒(需 PCR 筛选)。

五、研究意义
FRhK4 为全球消灭脊髓灰质炎提供核心支撑,其高效分离能力使野毒株检出灵敏度提升 50%,助力病例减少 99.9%(WHO 数据)。基础研究中,揭示胚胎肾细胞受体谱与病毒嗜性关联;公共卫生领域,支撑数十亿剂口服疫苗生产,为登革热等热带传染病防控提供关键工具,是连接胚胎细胞生物学与病毒学应用的重要桥梁。

以上信息仅供参考,详细信息请联系我们。



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