BY-1399 Vero E6-S非洲绿猴肾细胞悬浮适应株细胞系

病毒敏感性：保留对冠状病毒的高易感性，感染 SARS-CoV-2 后 48 小时病毒滴度达 10⁷ TCID₅₀/mL，与贴壁 Vero E6 细胞相当；对中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）、寨卡病毒等也具有敏感性，滴度较贴壁培养提升 10%-15%。

受体表达：血管紧张素转换酶 2（ACE2）表达量达 9×10⁴分子 / 细胞（流式检测），与贴壁细胞无显著差异，为冠状病毒入侵提供充足受体。

代谢特性：葡萄糖消耗速率为 25 mg/10⁶ cells / 天，乳酸积累量较贴壁细胞降低 25%，更适合高密度长时间培养。

灭活疫苗规模化生产：在 1000L 搅拌式生物反应器中，Vero E6-S 细胞密度达 3×10⁶ cells/mL，SARS-CoV-2 病毒滴度稳定在 10⁶.⁸ TCID₅₀/mL，单批次病毒产量达 3×10¹¹ TCID₅₀，可生产 3000 万剂灭活疫苗，较转瓶工艺效率提升 15 倍，生产成本降低 50%。疫苗中宿主细胞蛋白残留量＜30ng / 剂，符合 WHO 标准。

病毒样颗粒（VLP）表达：作为重组杆状病毒的宿主细胞，可高效表达冠状病毒 S 蛋白 VLP，产量达 5μg/10⁶ cells，纯度超 90%，免疫小鼠后中和抗体效价达 1:1280，为亚单位疫苗研发提供低成本生产平台。

病毒复制动力学研究：利用悬浮培养的均一性，精准测定 SARS-CoV-2 复制参数：潜伏期 8-10 小时，对数期 12-24 小时，平台期 24-48 小时，为优化疫苗生产工艺提供数据支撑。

高通量药物筛选：在 96 孔悬浮培养板中，可同时检测 200 种以上化合物的抗病毒活性，筛选效率较贴壁培养提升 4 倍。例如，通过该模型筛选出的 3CL 蛋白酶抑制剂，对 SARS-CoV-2 的 EC₅₀=1.2μM，与动物实验结果一致性达 0.90。

抗原制备：大量培养的病毒可用于制备冠状病毒诊断抗原，如 S 蛋白与 N 蛋白，ELISA 试剂盒敏感性达 98%，特异性＞99%，较传统贴壁培养抗原批间差异降低 60%。

中和抗体检测：作为病毒中和实验的标准细胞，其悬浮培养的均一性使检测变异系数＜5%，结果稳定性显著优于贴壁细胞，已被纳入多个国家的新guan疫苗临床评价标准。

培养基：无血清 SFM 培养基添加 4mM 谷an酰胺、0.1% Pluronic F-68，pH 维持在 7.2-7.4，每日监测溶氧（维持 30%-50%）与葡萄糖浓度（＞1.5g/L）。

传代流程：取对数期细胞悬液，1200rpm 离心 5 分钟，弃上清后用新鲜培养基重悬，按初始密度 8×10⁴ cells/mL 接种至摇瓶（转速 110rpm），避免细胞团过大（＞200μm）导致营养不均。

冻存保护：取密度 2×10⁶ cells/mL 的细胞，加入含 10% DMSO 的冻存液（SFM 培养基配制），程序降温后液氮保存，复苏时 37℃水浴解冻，直接接种至预热培养基（无需离心洗涤）。

冠状病毒接种：细胞密度达 2×10⁶ cells/mL 时，按 MOI=0.05 加入病毒液，37℃培养，感染后 24 小时补加 50% 体积新鲜培养基，48-72 小时收获病毒液，通过 0.45μm 滤膜澄清。

生物反应器控制：采用 pH-stat 补料策略，当 pH＞7.3 时补加葡萄糖溶液（500g/L），维持代谢稳定，可延长病毒复制期 12 小时，滴度提升 20%。

优势：

局限性：