BY-1400 VERO/WNV-NS1非洲绿猴肾细胞系

NS1 表达与分泌：NS1 蛋白在细胞内呈胞质分布，同时可分泌至细胞外，培养液中 NS1 浓度达 2-3μg/mL（ELISA 检测），显著高于 WNV 感染的 Vero 细胞（＜0.5μg/mL）。分泌型 NS1 保留天然构象，可与抗 NS1 特异性抗体结合，免疫荧光检测显示 95% 以上的细胞呈 NS1 阳性，表达均一性高（变异系数＜7%）。

生物安全性：无致瘤性（裸鼠接种实验阴性），外源病毒与支原体检测均为阴性，未整合 WNV 其他病毒基因，避免了潜在的病毒传播风险，符合人用诊断试剂生产的细胞基质要求。

病毒敏感性：保留对 WNV 的易感性，感染后病毒滴度达 10⁶-10⁷ PFU/mL，与亲本 Vero 细胞相当，可用于 WNV 复制与 NS1 功能的协同研究。

抗原制备：VERO/WNV-NS1 分泌的 NS1 蛋白可作为诊断抗原，用于 WNV 感染的血清学检测。通过亲和层析纯化的重组 NS1 纯度达 95% 以上，用其制备的 ELISA 试剂盒检测 WNV 阳性血清的敏感性达 97%，特异性＞99%，较传统病毒感染制备的抗原批间差异降低 60%，且避免了病毒培养的生物安全风险（无需 BSL-3 实验室操作）。

快速诊断试纸条生产：以该细胞系来源的 NS1 为捕获抗原，构建胶体金免疫层析试纸条，检测时间仅需 15 分钟，对 WNV 感染患者血清的检出率达 94%，适合基层医疗机构与野外疫情监测使用。

疫苗免疫原性检测：可用于 WNV 疫苗诱导的抗 NS1 抗体检测。例如，对 WNV 灭活疫苗免疫的小鼠血清，通过 VERO/WNV-NS1 细胞的间接免疫荧光实验，可定量分析抗 NS1 抗体效价，与中和抗体效价相关性达 0.85，为疫苗免疫效果评估提供补充指标（传统疫苗评估主要依赖中和抗体检测）。

NS1 亚单位疫苗研究：其分泌的 NS1 蛋白经纯化后可作为亚单位疫苗候选抗原，免疫小鼠后诱导的抗 NS1 IgG 效价达 1:6400，可显著降低 WNV 感染后的病毒载量（降低 100 倍以上），为开发无病毒颗粒的安全疫苗提供新思路。

中和抗体筛选：基于其稳定表达 NS1 的特性，可构建抗 NS1 抗体的高通量筛选模型。例如，通过噬菌体展示文库筛选获得的抗 NS1 单克隆抗体，在该细胞系中验证显示可抑制 NS1 的胞外分泌（抑制率达 80%），进而降低 WNV 的传播效率（体外实验中病毒扩散减少 60%）。

NS1 功能研究：利用该细胞系可解析 NS1 在 WNV 感染中的作用，如通过 CRISPR-Cas9 敲除内源性 NS1 表达后，发现 WNV 复制效率下降 50%，证实 NS1 对病毒复制的促进作用，为靶向 NS1 的抗病du药物设计提供理论依据。

培养基：DMEM 高糖培养基添加 10% 胎牛血清、1% 非必需氨基酸，pH 维持在 7.2-7.4，可加入青mei素 - 链mei素混合液（100U/mL）预防污染。

传代流程：当细胞融合度达 80%-90% 时，弃去旧培养基，PBS 洗涤 2 次，加入 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 溶液，37℃孵育 3-5 分钟至细胞脱落，加入含血清的培养基终止消化，按 1:4 比例接种至新培养瓶，避免过度融合导致 NS1 表达下调。

冻存保护：取对数生长期细胞，用含 10% DMSO 的wan全培养基重悬至密度 1×10⁶个 /mL，分装后经程序降温盒 - 80℃过夜，转移至液氮长期保存，复苏时 37℃水浴快速解冻，离心去除 DMSO 后接种，传代 2 次待细胞状态稳定后用于实验。

蛋白纯化：收集培养 48 小时的细胞上清，经 0.22μm 滤膜过滤后，使用 Ni²⁺亲和层析柱（NS1 含 6×His 标签）纯化，洗脱液经透析去除咪唑，BCA 法测定蛋白浓度，SDS-PAGE 验证纯度。

表达检测：通过 Western blot 检测 NS1（分子量约 48kDa），或 ELISA 定量分析培养液中 NS1 浓度，确保每批次抗原活性一致（批间差异＜10%）。

优势：

局限性：