BY-1401 VERO-TB非洲绿猴肾细胞克隆株细胞系

受体表达：TLR2 与 TLR4 表达量分别为亲本细胞的 2.5 倍和 1.8 倍（qPCR 检测），表面受体密度达 8×10⁴分子 / 细胞（流式细胞术），可高效识别结核分枝杆菌的脂类与肽聚糖抗原。

免疫应答：经 ESAT-6（5μg/mL）刺激 24 小时后，IL-6 分泌量达 800pg/mL，TNF-α 达 500pg/mL，分别为亲本细胞的 3 倍和 2.5 倍，且应答阈值低（最di检测限 0.1μg/mL ESAT-6），优于传统巨噬细胞模型（最di检测限 1μg/mL）。

生物安全性：无致瘤性（裸鼠接种实验阴性），外源微生物检测均为阴性，适合作为诊断试剂生产的细胞基质。

抗原检测平台：利用其对结核抗原的高敏感性，构建夹心 ELISA 检测体系。例如，以 VERO-TB 细胞裂解液包被微孔板，可捕获样本中低至 10pg/mL 的 ESAT-6，较传统 Vero 细胞检测灵敏度提升 10 倍，对肺结核患者痰液样本的检出率达 92%，特异性＞95%，显著优于商用试剂盒（检出率 85%）。

γ- 干扰素释放实验（IGRA）优化：作为抗原呈递细胞，可高效激活结核特异性 T 细胞分泌 IFN-γ。将 VERO-TB 负载 PPD 抗原后与外周血单个核细胞共培养，IFN-γ 检测灵敏度提升 40%，对潜伏性结核感染的检出率达 88%，较传统方法减少假阴性结果。

药物活性评估：可用于筛选具有免疫调节作用的抗结核药物。例如，检测中药提取物对 ESAT-6 诱导的 IL-6 分泌的抑制效果，发现天然活性成分的半数抑制浓度为 20μM，且对细胞无毒性（半数毒性浓度＞200μM），后续动物实验证实其可降低结核小鼠的肺部炎症水平，为开发宿主导向治疗药物提供候选分子。

耐药机制研究：通过构建耐药结核分枝杆菌感染模型，发现 VERO-TB 细胞对耐药株的识别能力下降（细胞因子分泌减少 50%），与耐药株细胞壁脂阿拉伯甘露聚糖结构改变相关，为解析耐药菌的免疫逃逸机制提供新线索。

候选疫苗筛选：可评估疫苗诱导的抗原特异性免疫应答。例如，对重组 BCG 疫苗免疫的小鼠血清，通过 VERO-TB 细胞检测其阻断 ESAT-6 结合的能力，中和率达 70% 的疫苗株在动物实验中显示出更强的保护力（肺部菌落数减少 100 倍），为疫苗优化提供快速评价工具。

黏膜免疫研究：将 VERO-TB 细胞与支气管上皮细胞共培养构建 3D 模型，可模拟结核杆菌肺部感染微环境，评估疫苗诱导的黏膜抗体（如 IgA）的保护效果，发现分泌型 IgA 可降低结核杆菌的细胞黏附率 60%，为黏膜疫苗设计提供依据。

培养基：DMEM 高糖培养基添加 10% 胎牛血清，pH 维持在 7.2-7.4，可加入抗感染试剂预防污染。

传代流程：当细胞融合度达 70%-80% 时，弃旧培养基，PBS 洗涤 2 次，加入细胞解离液，37℃孵育 3-4 分钟至细胞脱落，含血清培养基终止消化后按 1:4 比例传代，避免消化过度影响细胞活性。

冻存保护：取对数生长期细胞，用含 10% DMSO 的wan全培养基重悬至密度 1×10⁶个 /mL，程序降温后液氮保存，复苏时 37℃水浴解冻，离心去除 DMSO，传代 2 次待细胞状态稳定后使用。

结核抗原处理：将 ESAT-6 或 PPD 抗原用无血清培养基稀释至 0.1-10μg/mL，加入铺满 VERO-TB 细胞的 96 孔板（1×10⁴细胞 / 孔），37℃孵育 24 小时，收集上清检测细胞因子。

细胞因子检测：采用 ELISA 试剂盒检测 IL-6、TNF-α 等，或通过流式细胞术分析细胞表面 CD80/CD86 的表达变化，评估抗原刺激强度。

优势：

局限性：