注意事项:转化前请准确查找该质粒相应的抗生素名称、抗生素使用浓度、感受态名称和培养温度。
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl~50μl无菌水或 pH8.0 的 1*TE缓冲液来溶解质粒,室温放置1min;
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态,置于冰盒上解冻,并做好标记;
3、取2μl质粒加至100μl感受态中,冰浴30min;
4、42℃热激90s,再冰浴2min;
5、加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
6、6000rpm离心5min,仅留100ul上清混匀菌体沉淀;
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;
8、将平板正向培养1h,再倒置培养12h~16h;
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中,震荡培养12h~16h,根据实验需要提取质粒
pCMV-RFPL4A(human)-Neo |
pLV3-CMV-IL27RA(human)-3×FLAG-Puro |
pgtshβ(fish)-AVPR2(human)-T2A-EGFP |
pLV3-CMV-USP21(human)-3×FLAG-Neo |
pLV3-CMV-NES-PhoCl2c-mCherry-Puro |
pCMV-HOXC9(human)-3×FLAG-Neo |
pCMV-PSIP1(human)(1同义突变)-Neo |
pCMV-Eif4g3(mouse)-3×Myc-Neo |
pTLCV2-U6-NNMT(human)-sgRNA4-Cas9-EGFP-EF1a-Puro |
pTLCV2-U6-NNMT(human)-sgRNA3-Cas9-EGFP-EF1a-Puro |
pTLCV2-U6-NNMT(human)-sgRNA2-Cas9-EGFP-EF1a-Puro |
pTLCV2-U6-NNMT(human)-sgRNA1-Cas9-EGFP-EF1a-Puro |
pLV3-U6-TXNRD1(human)-shRNA3-Puro |
pLV3-U6-SLC22A3(human)-shRNA1-CopGFP-Puro |
pLV3-U6-HTRA2(human)-shRNA1-CopGFP-Puro |
pLV3-U6-ALDH2(human)-shRNA1-EF1-Puro |
pLV3-U6-Sting1(mouse)-shRNA1-EF1-Puro |
pLV3-U6-GPC1(human)-shRNA2-Puro |
pLV3-U6-RAC1(human)-shRNA1-Puro |
pLV3-U6-SREBF2(human)-shRNA1-Puro |
pLV3-U6-SC5D(human)-shRNA1-Puro |