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M15(pREP4)感受态细胞

产品规格CAT#: BFNC86088-01(10×100ul)/BFNC86088-02(50×100ul)

M15(pREP4)：                                                   100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                           10μl

保存条件(保质期)：                                   -80℃（6个月）

基因型

F-, Φ80ΔlacM15, thi, lac-, mtl-, recA+, KmR

产品说明

M15(pREP4)蛋白表达菌株含有pREP4质粒，该质粒通过p15A复制子启动复制，可以与许多原核表达质粒共存于同一大肠杆菌细胞中；同时该质粒携带lac I基因，可高效表达lac 抑制蛋白，在IPTG诱导前可抑制目标蛋白的本底表达，特别适合毒性基因的表达。M15(pREP4)菌株是PQE系列质粒的配套菌株，特别适合PQE系列质粒或由E.coli T5 启动子诱导表达的质粒的蛋白表达。pREP4质粒赋予该菌株卡那霉素抗性。

青旗生物生产的M15(pREP4)感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达2×10⁸cfu/μg DNA。

操作方法

1. M15(pREP4)感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒并用手bo打EP管底混匀，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上（若质粒浓度较高，也可稀释后涂板，务必保证能在平板上挑到单克隆菌落）。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养，M15(pREP4)菌株在平板或液体培养基中生长时，需在培养基中加入终浓度为35ug/ml的卡那霉素。

M15(pREP4)感受态细胞

IPTG配制：

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)

by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

注意事项

1. 感受态细胞尽量在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. M15(pREP4)菌株在平板或液体培养基中生长时，需在培养基中加入终浓度为35ug/ml的卡那霉素。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。

4. 为获得需要量的蛋白，诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。