细菌基因组提取试剂盒 返回列表页

产品货号：27102

产品规格：50 次/100 次

产品简介：

细菌基因组提取试剂盒采用新型硅基质膜技术和试剂配方，通过快速简单的结合-洗涤-洗脱三步即可从细菌中提取基 因组，每个吸附柱至多可吸附 10μg 的 DNA，同时大限度的去除引物、寡核苷酸、酶等杂质。纯化提取的 基因组纯度及浓度高，完整性好，可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。

包装清单：

自备试剂：无水乙醇。

操作步骤：

1. 收集适量细菌于 1.5ml 离心管中，8000rpm 离心 5min，吸弃上清。加入 400μl Re-Suspension Buffer 将 菌体重悬。

2. 8000rpm 离心 5min，吸弃上清留沉淀。加入 600μLLysis Buffer，用移液器轻轻吹匀后于 60℃孵育 5min。

3. 室温静置 5min，加入 RNase A 2μl，上下颠倒混匀 3 次，37℃孵育 20min。

4. 柱平衡：向已装入收集管（Collection Tubes）中的吸附柱（Spin Columns）中加入 200μl Buffer PS，12000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

5. 将步骤 3 或 4 所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置 2 分钟，12000 rpm 离心 1 分钟，倒 掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。

6. 向吸附柱中加入 450 μl Buffer PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000 rpm 离心 1 分钟， 倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。

7. 注意：如果纯化的 DNA 用于盐敏感的实验（例如平末端连接或直接测序），建议加入 Buffer PW 静置 2-5 分钟再离心。

8. 重复步骤 6。

9. 12000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液。

10. 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR 等）。

11. 将吸附柱放到一个新的 1.5 ml 离心管（自备）中，向吸附膜中间位置悬空滴加 50μlBuffer EB，室温放 置 2 分钟。12000 rpm 离心 1 分钟，收集 DNA 溶液。-20℃保存 DNA。

注意：

(1)洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其 pH 值在 7.0-8.5 之间（可以用 NaOH 将水的 pH 值调到此范围）。

(2)为了提高基因组的提取量，可将离心得到的溶液重新加到吸附柱中，室温放置 2 分钟，13,000 rpm 离心 1 分钟。

(3)洗脱体积不应小于 30μl，体积过少会影响回收效率。

注意事项：

1. *使用前应按照试剂瓶标签的说明在 Buffer PW 中加入无水乙醇。

2. 所有离心步骤均可室温下进行。