稳定细胞系构建 返回列表页

服务简介：

与瞬时转染不同，稳定细胞系是指外源基因进入受体细胞，并整合到细胞的染色体上，使得宿主可以长期表达目的基因。稳定细胞系表达蛋白（抗体）的稳定性更好，批次间差异也更小，然而构建一个有效的细胞系是一件复杂而费时的工作——艾柏森专业的生物医药研发服务机构，拥有丰富的哺乳动物细胞培养经验，基于公司多样的成熟平台，为您提供优质的稳定细胞系构建服务。

本公司服务包括但不限于下列服务项目：
1、基因过表达稳转细胞细胞系构建服务（基因过表达多克隆细胞株构建服务、基因过表达单克隆细胞株构建服务）：

因过表达细胞株构建服务包括目的基因过表达慢病毒载体构建、病毒包装、细胞转染和筛选。您只需提供目的基因的cDNA质粒和需要构建的细胞系，我们将按照您的要求完成目的基因过表达细胞株的构建和检测，提供给您高质量的基因过表达稳定细胞株。
2、RNA干扰基因敲减稳转细胞株筛选服务（RNA干扰基因敲减细胞株多克隆构建服务、RNA干扰基因敲减细胞株单克隆构建服务）：

艾柏森的RNA干扰基因敲减细胞系构建基于慢病毒表达系统，一般采用U6启动子驱动的pLVshRNA-puro或pLVshRNA-EGFP(2A)puro载体构建RNA干扰稳定细胞株，服务内容包括干扰载体构建、靶点筛选、干扰效率验证及稳定细胞筛选和克隆。

3、CRISPR基因敲除稳定细胞株构建服务：

随着talen和Cas9/gRNA基因敲除系统的出现，基因定点敲除的难度大幅下降。全新的技术将基因敲除从价格高昂，耗时漫长的ZNF系统，逐渐变成简便的研究工具。现在我们可提供Talen和Cas9/gRNA两个系统的基因敲除服务。包括基因敲除靶点设计，talen质粒组装，Cas9/gRNA质粒构建及基因敲除效率验证。

稳定转染细胞株服务流程：
a、载体构建：将外源基因构建到合适的载体上。
b、细胞筛选浓度测定：以10-14天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度。
c、细胞接种：转染实验前天接种细胞，各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞应达到60%-80%覆盖。
d、细胞转染：用构建好的载体转染目的细胞。
e、使用抗生素对细胞进行筛选。
f、筛选结果鉴定；

稳定细胞株筛选方法：

1、转染质粒后，单克隆方法筛选稳定细胞系：对大多数细胞转染效率较低。对于基因过表达，如果转染效率达到40%，基因过表达尚可。但是对于基因干扰实验，对转染效率要求远远高于基因过表达，通常质粒转染无法满足。

另外，质粒游离于细胞质中，很快降解，无法满足较长时间的检测项目；质粒转染整合几率极低，稳定细胞株构建耗时耗力，且得率很低，往往需要挑取单克隆株。
2、病毒感染筛选稳定细胞株：病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效，是目前主流的稳定细胞系筛选方法。用慢病毒制备稳转细胞株，由于其高效整合、高效转录、高效表达、宿主范围广，感染效率高，且与细胞染色体整合而不发生基因重排，是制备稳定细胞株的理想载体。 
服务优势：
1、稳定：保证15代以内稳定转染细胞稳定表达。
2、迅速：一般控制在1个月以内完成构建。
3、经济：价格实惠，性价比高。
4、质量保证：对外源基因进行严格鉴定。