RT-PCR检测试剂盒

RT-PCR检测试剂盒说明书
口蹄疫（foot-and-mouth disease，FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的多种偶蹄动物高度接触性传染病。口蹄疫病毒属于小核糖核酸病毒科口蹄疫病毒属，病毒基因组为单股正链 RNA，约含 8500 个核苷酸。目前已知该病毒有 7 个血清型，分别为 O、A、C、Asia1、SAT1、SAT2 和 SAT3，每种血清型包括多个亚型，各型之间无交叉保护。我国及周边国家流行 O 型、A 型和 Asia1型 3 种血清的 FMDV，对 FMDV 进行准确定型和遗传变异分析，是 FMD 疫苗选择和防控措施制定的重要依据。
为此，本公司建立了一种能扩增 O 型、A 型和 Asia1 型 3 种血清型 FMDV的通用 RT-nPCR 方法，灵敏度高，特异性强。

RT-PCR检测试剂盒具有下列特点：
1. 通用性强，可用于 O 型、A 型和 Asia1 型 3 种血清型 FMDV 的定性鉴定检测和分子流行病学调查。
2. 能对样品中 FMDV 进行快速检测，具有良好的特异性和敏感性。
3. 结合扩增产物的克隆测序技术，可对 FMDV 进行准确分型。
4. 使用一管式 RT-PCR 试剂盒，减少了操作步骤，降低了操作误差
规格及成分 成 分 编 号 25 次包装
2×miRNA qPCR Mix 131042A 0.75 mL
Reverse Primer(10 μM) 131042B 30 μL
RNase-Free Water 80403 1 mL
miRNA cDNA *链合成试剂盒 130911 25 次
使用手册 131041sc 1 份
运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂 样品、qPCR 上游引物（Forward primer）等
使用方法 一、miRNA cDNA *链合成
请参见 miRNA cDNA *链合成试剂盒产品使用手册。
二、miRNA 荧光定量检测
1. 室温融化 2×miRNA qPCR Mix 和 Reverse primer（10 μM）。
2. 使用时请将 2×miRNA qPCR Mix 上下颠倒轻轻均匀混合，避免起泡，并
经短暂离心后使用。如果试剂没有混匀，其反应性能会有所下降。
3. 按照下表组分配制荧光定量 PCR 反应体系：
试剂组分 体积
2×miRNA qPCR Mix 25 μL
Forward Primer（自备） 1 μL
Reverse Primer 1 μL
miRNA *链 cDNA X μL
RNase-Free Water 至 50 μL
4. 建议反应程序设置如下：
循环 温度 时间
1× 95℃ 10 min
40-45×
95℃ 15 s
60℃ 1 min
溶解曲线分析 根据 PCR 仪要求设定
注：本产品所采用的热启动酶须在预变性 95℃、10 min 条件下实现酶的活化。
注意事项 1. miRNA *链 cDNA 的加入量不要超过 Real time PCR 体积 10%。
2. 对于特殊的检测体系，高含量的 cDNA 模板易导致非特异性扩增，根据所
检测 miRNA 的丰度适当的稀释 cDNA（稀释 10 倍或者 100 倍）。
3. 2×miRNA qPCR Mix 中含有 SYBR Green I 和 ROX 染料，保存本产品
或配制 PCR 反应液时应避免强光照射。
关联产品 一站式柱式 miRNAOUT（CAT#:80104）