化学发光法激酶活性检测试剂盒

 Kinase-Lumi™化学发光法激酶活性检测试剂盒(Kinase-Lumi™ Luminescent Kinase Assay Kit)，是一种通过化学发光法测定激酶反应后溶液中ATP的剩余量(zui高可达10μM)来定量检测激酶活性的试剂盒。本试剂盒也可用于检测任何消耗ATP的酶，例如ATPase。
      本试剂盒可以检测反应体系中浓度zui高为10μM的ATP，并在0-10μM范围内有良好的线性关系。对于更高浓度的ATP，可以选购检测浓度上限为50μM的Kinase-Lumi™增强型化学发光法激酶活性检测试剂盒(Kinase-Lumi™ Plus Luminescent Kinase
Assay Kit)或上限为200μM的Kinase-Lumi™*型(Kinase-Lumi™ Max Luminescent Kinase
Assay Kit)，或者需要适当稀释后再进行检测。另外两个试剂盒分别在0-50μM和0-200μM范围内有良好的线性关系。
      本试剂盒应用范围广，适用于各类消耗ATP的激酶，包括以蛋白或多肽为底物的蛋白激酶和以糖、脂、醇等为底物的非蛋白激酶。本试剂盒也同样适用于检测消耗ATP的ATPase。
      本试剂盒的检测激酶活性的原理参考图1。激酶在反应过程中催化ATP上的磷酸基团转移到底物的羟基上，从而使ATP转变为ADP，这样就可以根据ATP的减少量来定量激酶的活性。借助ATP依赖的萤光素酶(也称荧光素酶)催化的萤光素发光反应，ATP可以通过测定化学发光来进行定量。这样就可以通过设置ATP的标准曲线，来定量激酶反应体系中的ATP剩余量，从而计算出ATP的消耗量，zui终计算出激酶的活性。激酶的活性和ATP的剩余量成反比，即激酶活性越高，ATP剩余量越少，发光值越低；反之，激酶活性越低，ATP剩余量越多，发光值越高。

图1. 本试剂盒检测激酶活性的原理图。
      本试剂盒的使用非常便捷，对于待测样品仅需加入等体积的检测试剂即可完成检测反应，并且检测反应可以仅在一个孔内完成。本试剂盒不仅适合少量样品的检测，也非常适合大量样品的高通量筛选(high-throughput screening)检测。
      本试剂盒不仅操作特别方便，并且由于使用了热稳定的萤火虫萤光素酶并对反应体系进行了优化，检测体系的发光信号也非常稳定。加入检测试剂后10分钟即可产生非常稳定的化学发光，30分钟内化学发光的下降通常不会超过10%。
      对于96孔板，我们推荐使用50μl激酶反应体系和50μl的检测试剂，总体积为100μl，此时本试剂盒可以进行200或2000次检测。对于384孔板，我们推荐使用10μl激酶反应体系和10μl的检测试剂，总体积为20μl，此时本试剂盒可以进行1000或10000次检测。也可以用其它体积，但激酶反应体积和检测试剂体积的比例必须为1:1。
包装清单：
产品编号    产品名称    包装
S0150S-1    Kinase-Lumi™化学发光法激酶活性检测试剂    10ml
S0150S-2    0.5mM ATP    0.2ml
—    说明书    1份
保存条件：
      -20℃保存，半年有效。-80℃保存，一年有效。检测试剂需避光保存。
注意事项：
      本试剂盒的检测试剂中含有萤光素酶，反复冻融会导致其逐渐失活。为取得较好的使用效果，*次解冻后可适当分装，且分装后的检测试剂冻融次数不宜超过3次。反复冻融过程中，可能会导致检测试剂中出现少量沉淀，此时宜平衡至室温，并尽量溶解。如仍有残留的不溶物，可以离心去除后使用，经测试不会影响后续的检测效果。
      建议激酶或ATPase的反应尽量在室温(约25℃)进行，如果不是在室温进行，需把样品平衡至室温才能用本试剂盒检测。
      中提供的ATP仅足够用于标准曲线的检测，用于激酶反应的ATP需自备。
      检测时需使用白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或384孔板，相邻孔之间会产生相互干扰。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。