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上海莱睿科学仪器有限公司
主营产品： 安捷伦液相色谱仪,气相色谱仪,尼高力红外光谱仪,IKA磁力搅拌器,TOMY高压灭菌锅 |
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2017-12-25 阅读(2552)
安捷伦气相色谱仪测定鱼油中DHA和EPA的含量-深海鱼油是指从深海中鱼类动物体中提炼出来的不饱和脂肪成分，分别为EPA和DHA。鱼油是指富含EPA(二十碳五烯酸）、DHA(二十二碳六烯酸）的鱼体内的油脂。普通鱼体内含EPA、DHA数量极微，只有寒冷地区深海里的鱼，如三文鱼、沙丁鱼等体内EPA、DHA含量*，而且陆地其他动物体内几乎不含EPA、DHA。因此选用深海鱼来提练EPA及DHA。
作用功效
1、调节血脂，清理血栓，防止血液凝固，预防脑血栓、脑溢血及中风。
2、预防关节炎、缓解痛风、哮喘，暂时缓解由关节炎引起的肿痛。
3、预防老年痴呆症、营养大脑、改善记忆。
4、改善视力、防治老花眼。
5、维护视网膜。
随着消费者需求量的不断增加，市场上鱼油制品层出不穷，但其有效成分EPA、DHA含量存在较大差异，因此，建立鱼油制品中EPA与DHA的快速检测方法，识别假冒产品，具有一定的意义。
一、实验部分
1.1
仪器及材料
安捷伦气相色谱仪7820A（附氢火焰离子化检测器）
1.2 色谱条件
色谱柱：Alltech EC-1000，30m×0.25mm×0.25μm；色谱柱温度：198 ℃恒温3 min，以10 ℃/min升温至248 ℃，维持12 min；进样口温度：280 ℃；FID检测器温度：280 ℃；进样方式：分流，分流比30:1；进样量：1μL；载气：氮气。
1.3 试剂
EPA/DHA甲酯标准品(纯度≥99％)，内标物——二十三碳酸甲酯标准品(纯度≥99％)，均购于美国SIGMA公司。2 mol/L氢氧化钾－甲醇溶液。正庚烷、甲醇均为色谱纯、氢氧化钾为分析纯。
1.4 操作步骤
1.4.1 标准溶液制备
DHA甲酯、EPA甲酯、二十三碳酸甲酯标准样 品：均配制成浓度为1.0 mg/mL的正庚烷溶液。 1.4.2 样品制备[4] 称取试样500 mg至具塞试管中，用移液管移取5 mL正庚烷溶解试样，用移液管移取2 mL氢氧化钾—甲醇溶液，盖上玻璃盖猛烈振摇1 min后，加蒸馏水至试管颈部，置于离心机以3000 r/min离心5 min，移取2 mL上清液至具塞试管，加入2 mL内标液，定容置10 mL，供上机测定。以标准品保留时间定性，由相对质量校正因子来定量计算鱼油样品中的EPA和DHA含量。
1.4.2 样品制备
称取试样500 mg至具塞试管中，用移液管移取5 mL正庚烷溶解试样，用移液管移取2 mL氢氧化钾—甲醇溶液，盖上玻璃盖猛烈振摇1 min后，加蒸馏水至试管颈部，置于离心机以3000 r/min离心5 min，移取2 mL上清液至具塞试管，加入2 mL内标液，定容置10 mL，供上机测定。以标准品保留时间定性，由相对质量校正因子来定量计算鱼油样品中的EPA和DHA含量。
1.4.3 结果计算
对所得的色谱图，以内标法进行结果计算：
式中：AX—EPA、DHA的峰面积；AIS—内标峰的峰面积；
FX—EPA或DHA的校正因子；WIS—样品中内标物的加入量(mg)；WS—样品量(mg)；FW—EPA、DHA甲酯换算成EPA、DHA的换算因子，EPA=1.105，DHA＝1.096；25—样品前处理过程中稀释倍数。
二、安捷伦气相色谱仪测定鱼油中DHA和EPA的含量结果讨论
2.1 样品前处理方法的选择
油脂中脂肪酸的测定通常需要甲酯化处理，常用的甲酯化方法有三氟化朋法、*基氢氧化硫（TMSH）法、甲醇钾法、重氮甲完、盐酸/甲醇、硫酸/甲醇和氢氧化四甲胺/甲醇等[5]。本文主要用氢氧化钾/甲醇法，针对性检测鱼油制品中的EPA与DHA，该法具有操作简单、快捷的特点。 2.2 EPA甲酯和DHA甲酯的色谱分离
深海鱼油样品加入内标C23:0甲酯的气相色谱图见图1
由图1可见，EPA甲酯、DHA甲酯和C23:0甲酯 的保留时间分别为12.898 min、18.052 min、14.785 min，三种脂肪酸甲酯分离良好，并且其余组分不干扰测定。
2.3 校正因子的测定
采用内标法测得EPA甲酯和DHA甲酯对内标C23:0甲酯的相对质量校正因子，结果见表1。
2.4 方法精密度
取同一深海鱼油样品5份，按1.4.2所述步骤测定，1.4.3定量分析，得EPA和DHA的精密度，结果见表2。
2.5 EPA和DHA的回收率
于100 mg的深海鱼油样品中分别加入一定量的EPA和DHA，按1.4.2所述步骤测定，1.4.3定量分析，进样次数为5次，测定结果见表3。
2.6 样品测定
对3种市场上销售的深海鱼油样品进行测定，测定结果见表4。由表4可知，样品1中EPA、DHA含量比标称数据明显偏低，样品2、3中EPA、DHA含量与标称数据基本吻合。
三、安捷伦气相色谱仪测定鱼油中DHA和EPA的含量结论
内标法是气相色谱当中一种比较理想的定量方法，它要求内标物与被分析物质的化学性质要相似，而对操作条件要求不高，内标法是测定脂肪酸含量的方便准确的定量方法。一般通常使用C17:0等单饱和脂肪酸甲酯作为测定脂肪酸的内标物，其保留时间与EPA和DHA的保留时间相差较大。使用二十三碳饱和脂肪酸甲酯作为测定EPA、DHA的内标物，其性质和EPA、DHA相近，保留时间位于两者之间，并且通过不同鱼油样品的分析，试样中*不含有C23:0，不受试样中其它组分峰的影响，能满足准确 测定EPA和DHA的要求。
