小鼠外周血淋巴细胞分离液试剂盒

本分离液为Ficoll、羟乙基淀粉550与泛影酸葡jia胺的混合液。抗凝外周血可在分离液中分层。离心时，在Ficoll、羟乙基淀粉的作用下红细胞与粒细胞聚集并迅速沉降；此时，淋巴细胞及其他单个核细胞仍处于分离液上层，红细胞污染可忽略不计。大部分血小板可在细胞清洗低速离心过程中去除。 其他人及动物多种比重细胞分离液，因不同种属不同比重分离液的细胞离散系数及细胞带电不同，用户在制定分离液时应提供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。

小鼠外周血淋巴细胞分离液试剂盒

注意事项：

A．本实验要求，在正常大气压下，分离液、分离样本以及分离环境温度为20℃±2℃。分离液在低温时呈较高密度，在高温时呈较低密度。细胞分离液从冰箱取出后，不可立即使用，操作前可将样本和分离液复温18-22℃。为获得实验结果，建议在取血后2小时内进行实验，血液提取后存放时间越长细胞活性越低。

B．实验过程中，如需稀释血液或洗涤细胞，不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液，其成分会导致血细胞凝集，大大降低细胞得率及纯度。

C．you抗凝剂选择：EDTA、枸橼酸、肝素，其他抗凝剂也可使用，但会影响细胞活性。应注意在血液稀释过程中去除抗凝剂体积。

D．实验操作时，不可使用含粉手套、不可使用内毒素含量过高的液体，手套中的粉末颗粒及高内毒素会激活淋巴细胞从而降低细胞得率及活性。

E．本实验不可使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，其带有的静电作用将导致细胞贴壁影响分离效果。推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。

F．吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加。吸取过多的淋巴细胞层上层溶液会导致血浆蛋白及血小板混杂。

G．如需进行B、T细胞计数，则需血液贮藏时间不得多于10小时，否则将导致细胞被激活，得率降低。

H．为去除所混杂的血小板，可在分离液上层加上4-20%蔗糖梯度等渗溶液进行二次离心。

I．细胞纯度可在步骤10后使用瑞氏染色方法确定，细胞活性可用台盼蓝处理后观察。

J．由于各品牌离心机的性能不同，国内南北地区温度环境和四季的差异，可能影响分离效果，用户可以调节离心转数和离心时间，摸索jia的分离条件（具体分离条件各实验室自定）。

参考文献：
《Alteration of Adaptive Immunity in a Colorectal Peritoneal Carcinomatosis Model》 作者:Rongchen Shi,1,* Wei Xiang,1,* Xia Kang,1 Lili Zhang,2 Jinping Wang,3 Hongming Miao,1,? and Fengtian He 期刊:JOURNAL OF CANCER  影响因子:3.249 PMID:30719130

《Immunogenicity evaluation of MS2 phage-mediated chimeric nanoparticle displaying an immunodominant B cell epitope of foot-and-mouth disease virus》 作者:Guoqiang Wang, Yunchao Liu, Hua Feng, Yumei Chen, Suzhen Yang, Qiang Wei, Juan Wang, Dongmin Liu, Gaiping Zhang 期刊:PeerJ 影响因子:2.353 PMID:29844975